АВТО БЛОГ YAMAHA-VOLGA.RU

1957 hmb: 1957 Нмв Михаил Нестеров

31 июля, 2021 by admin

1957 Нмв Михаил Нестеров

Уроки Михаила Нестерова (1957НМВ)

За ней последовали «За Волгой», «Великий постриг» (18971898), «На Волге» (1905), «Думы» (1901), «Усталые», «Лето», «Одинокие», «Две сестры». Старший брат – Виктор служил в системе Главного разведывательного управления (полк связи под Коломной), трагически погиб в 1983 году. Картина «Видение отроку Варфоломею» (1889—1890) написана Нестеровым на сюжет, взятый из «Жития преподобного Сергия» авторства Епифания Премудрого. Создана она была после глубокой личной трагедии, постигшей художника. Затем последовал ряд книг, написанных на современном материале. Боевой офицер, афганец. Этот уникальный тип пейзажа (близкого по духу И. Левитану, лирического, лишённого внешнего лоска и ярких красок, проникнутого любовью к России) получил потом название «нестеровского».

Боярин Дружина Андреевич Морозов перед Иваном Грозным» (1885). внизу с левой стороны картины. Родился в городе Куйбышеве в 1959 году, в семье рабочих.

Педагогами Михаила Нестерова были Василий Перов, Илларион Прянишников, Алексей Саврасов. На момент Октябрьской революции художнику исполнилось пятьдесят пять лет. Увлекается восточными единоборствами. Свою первую книгу — «Посланники Великого Альмы» Михаил Нестеров написал в 1996 году, двумя годами позже этот приключенческо-фантастический роман был опубликован в самарском альманахе «Калейдоскоп». Целью путешествия Нестерова в Соловецкий монастырь частично были также художественные поиски, связанные с замыслом большой программной картины «Святая Русь», которая должна была подвести итоги его творческого пути. Горожане его почитали.

Витоге втворчестве художника появился особенный женский образ, который современники прозвали «нестеровской девушкой». Среди его работ раннего периода (1879—1884) можно отметить следующие картины на бытовую тематику: «В снежки», «В ожидании поезда», «Жертва приятелей», «Домашний арест», «Знаток» и «Экзамен в сельской школе». После выхода в отставку посвятил себя литературной деятельности.

видео уроки пдд 2015 михаил нестеров

Лето 1883 года провёл в Уфе, где познакомился с М. И. Мартыновской, своей будущей женой. В своё время на Нестерова очень сильное впечатление произвели романы Мельникова-Печерского («В лесах», «На горах» и другие), посвящённые жизни заволжских старообрядцев. Эта цитата после долгих колебаний художника и была наведена рукой П. Д. Корина в 1927г. Работа при росписи храмов наложила отпечаток на всё творчество Нестерова, в котором особое место занимает религиозная тема, тема «Святой Руси».

Его семья была купеческой, родители— хорошо образованными людьми широких взглядов. Сам Нестеров считал «Душу народа» одним из наиболее значимых своих произведений и неоднократно повторял: «В начале жизни— Отрок Варфоломей, к концу— Душа народа». По словам Михаила, писать он начал в тот момент, когда и родилась идея первой книги. Среди произведений этого цикла особо выделяется картина «Великий постриг» имевшая, как и многие другие работы художника, автобиографическую основу. Боевой офицер, афганец.

1. Михаил Нестеров: ПДД видеоуроки
2. Видео уроки ПДД России-2018 – Видео уроки ПДД – Отзывы (1/5)
3. Работы художника – Нестеров Михаил (286 работ)
4. Михаил Нестеров художник картины
5. Почему на переезде надо смотреть по сторонам

Именно он оказывается смысловым центром картины, невольно наводя зрителя на евангельские слова: «Если не будете как дети, не войдёте в Царство Небесное» (Мф. 18:3). Особенно большое значение Нестеров придавал роли святого в сплочении русского народа. Родился Михаил Нестеров в1862 году вУфе.

Лишь в 1920 году вновь вернулся в столицу. Содержание полотна точно передаёт второй вариант названия: «Приидите ко Мне все труждающиеся и обременённые и Аз успокою вы»— на ней изображён Христос в окружении святых и обременённые тяжкой ношей жизни странники (народная Россия), пришедшие к Нему каждый со своей бедой. С Киевским показом «вчерне» законченной «Святой Руси» было связано знакомство, которое оказалось переломным в жизни Нестерова. В 1895 году была создана картина «Под благовест» (настоящее нестеровское название: «Монахи»).

В1886году, спустя год после свадьбы, вовремя родов скончалась его жена Мария. Поражённый художественным талантом её автора, пригласил Нестерова на работу в собор. Здесь также впервые изобразил он неброскую красоту среднерусской природы.

• Экзаменационные маршруты ГИБДД Людиново
• 1 Общие положения, понятия и термины
• Проезд перекрёстков с круговым движением 2017
• Упражнение Остановка и начало движения на подъёме
• Буксировка транспортных средств 2017
• Дополнительные требования к движению водителей мопедов

Всех их насквозь пронизывает чисто-русская «любовь-жалость» автора к героиням, на всех тема одна и та же: раскрытие тайников народной души— чуткой, глубокой женской души, напрасно одарившей любовью не стоящего такого чувства человека и готовой скрыться в поисках покоя за стеной старообрядческого скита. Образ Сергия Радонежского, близкий и дорогой художнику с самого детства, был для него воплощением нравственного идеала. Михаил Петрович Нестеров (р.

Дата рождения – 31 мая 1862 года. Первой работой, вкоторой воплотились характерные для зрелого творчества Михаила Нестерова черты, стала «Христова невеста». Участник боевых действий в Афганистане по контракту. Пишет стихи. Это историческое событие оказалось для Нестерова своего рода чертой.

Одна лишь только картина Нестерова посвящена теме счастливой любви. Но обстоятельства сложились иначе и художник оказался в реальном училище К. П. Воскресенского. Здесь особого внимания заслуживает написанная на стене трапезной картина «Путь ко Христу». Первой картиной цикла стала работа «На горах» (1896).

• Расположение транспортных средств на проезжей части
• Знаки дополнительной информации
• Начало движения, маневрирование
• Пользование внешними световыми приборами и звуковыми сигналами

Таково было распоряжение отца. 1890 году «Отрока Варфоломея» увидел профессор Прахов, заведовавший росписью Владимирского собора в Киеве. художник решился выставить на публичное обозрение «вчерне» законченную работу. Переехавший в 1918 году в Армавир художник Нестеров Михаил Васильевич заболел. Родился в городе Куйбышеве в 1959 году, в семье рабочих. В 1905—1906гг. В это время Нестеров выполнял для заработка также рисунки для журналов и книг (в том числе для собрания сочинений А. С. Пушкина, для сказок и былин) в «Издательстве А. Д. Ступина».

Детали одной фигуры несколько противопоставлены другой. Здесь его руководителем становится В. Г. Перов. С 1884 года писал жанровые картины на исторические темы, такие как «Приём послов» (1884), «Смерть Лжедмитрия», «Сбор на погорелый храм в Москве» (эскизы, 1885), «Шутовской кафтан. Нестеров создавал и собственные графические и живописные автопортреты. Пришедшая посмотреть его картину Екатерина Петровна Васильева спустя несколько месяцев стала его женой.

Первой значительной картиной, свидетельствующей о самобытности нестеровского таланта, был «Пустынник», написанный художником в 1888-89 гг.

1. Движение через железнодорожные пути
2. Обгон, опережение, встречный разъезд
3. Приоритет маршрутных транспортных средств
4. Устойчивость автомобиля на дороге

В 1882 году Нестеров вновь поступил в Училище живописи, учился у А. К. Саврасова. Еечертами наделяет художник героиню своей картины. «Настроение»— это слово неизменно повторялось почти во всех отзывах зрителей, критиков и художников.

Основную часть из них составляли женские портреты. Но о карьере музыканта пришлось забыть после травмы руки. Под ихвлиянием ранние картины Нестерова созданы втрадициях передвижничества. Из-за болезни он долгое время не мог работать. Сначала художник колебался, принять ли это предложение.

Эти картины отличаются вниманием кличности портретного героя иего роду занятий. За что Михаил Васильевич Нестеров был очень благодарен своему отцу. В 1874 году Михаил Нестеров переезжает в Москву для поступления в техническое училище. Место его рождения – город Уфа. Весной 1902г.

Проживает с семьей в Самаре. Эта картина— «Два лада» (1905), навеянная русской народной сказкой-идиллией и известной балладой А. К. Толстого, начинающейся со слов: «Порой весёлой мая» На ней изображены юноша и девица в древнерусском княжеском одеянии. Вернувшись в Москву, учился в классе В. Е. Маковского. После выхода в отставку посвятил себя литературной деятельности. Главная тема картины— реквием по несбывшемуся счастью. В этот период, помимо картин «Два лада» и упомянутой выше «За Волгой», были созданы ещё «Лето» и «Свирель».

Счастье их первой любви созвучно весеннему ликованию природы. Например, в замечательной книге По багровой тропе в Эльдорадо Эдуарда Кондратова всего лишь один эпизод столкновения конкистадоров с амазонками – но такой яркий, что запомнился юноше на всю жизнь. Этот человек очень сильно повлиял на раннее творчество Нестерова.

• Общее устройство легкового автомобиля
• Основы безопасного управления автомобилем
• Экзаменационные задачи по теме предписывающие знаки
• Теория ПДД Предписывающие знаки

Порядок использования внешних световых приборов и звуковых сигналов. | План-конспект занятия:

План урока

ПМ 02. Техническое обслуживание автотранспорта»

          МДК 02.02. «Теоретическая подготовка водителей категории «В, С»

Профессия 23.01.17 : «Мастер по ремонту и обслуживанию автомобилей».

Группа №1.0          Срок обучения- 10 месяцев.

Раздел 2. Правила дорожного движения

Тема 2.10. Порядок использования внешних световых приборов и звуковых сигналов.

                                                                                                                    Продолжительность занятия: 2 часа.

Вид занятия: комбинированный урок.

Методы обучения:

1. Объяснительно-иллюстративный.
2.  Репродуктивный.

Используемые технологии:

1.  Информационно-развивающие (изложение преподавателем учебной информации с использованием технических средств обучения).
2.  Деятельностные (решение тематических задач).

Цель урока: изучение правил использования внешних световых приборов и подачи световых и звуковых сигналов.

Задачи урока:

1. Образовательная (ознакомление учащихся с порядком использования световых приборов и звуковых сигналов).

 Воспитательная (формирование ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес

2. осознание необходимости строгого соблюдения правил использования внешних световых приборов и подачи световых и звуковых сигналов для обеспечения безопасности участников дорожного движения).
3.  Развивающая: (применение знаний Правил дорожного движения в конкретных дорожных ситуациях, формирование умений в оценке дорожной ситуации и принятии решений в конкретной обстановке).

Формируемые ПК:

ПК 1. Управлять автомобилями категорий «В».

ПК 2. Выполнять работы по транспортировке грузов и перевозке пассажиров.

ПК 3. Осуществлять техническое обслуживание транспортных средств в пути следования.

ПК 4. Устранять мелкие неисправности, возникающие во время эксплуатации транспортных средств, знать назначение. Знать расположение, принцип действия основных механизмов и приборов ТС.

Обеспечение занятия

1.  Электронные учебно-наглядные пособия (ИМСО «Автошкола МААШ». Модуль «Правила дорожного движения»; ИМСО «Автошкола МААШ». Модуль «Экзаменационные билеты и тематические задачи»).
2. Сайт 1957 НМВ. РФ. Видеоурок « Пользование внешними световыми приборами и звуковыми сигналами».
3.  Литература (Правила дорожного движения Российской Федерации).
4.  Технические средства обучения (экранно-звуковые: компьютер, мультимедийный проектор, экран).

             Организация занятия

1.  Организационный момент (5 минут).

1.  Приветствие.
2.  Проверка присутствующих.
3.  Объявление темы, целей занятия и учебных вопросов.                                                      2.  Входной контроль знаний (10 минут).                                                                                                           2.1. Как должны действовать водители, приближающиеся к пешеходному переходу? (Водитель обязан уступить дорогу пешеходам, переходящим дорогу или ступившим на проезжую часть).

2.  Как должны действовать водители, приближающиеся к месту остановки маршрутных транспортных средств? (Водитель должен уступить дорогу пешеходам, идущим к стоящему в месте остановки маршрутному транспортному средству или от него ( со стороны дверей), если посадка и высадка производится с проезжей части или с посадочной площадки).
3.  Как должны действовать водители, приближающиеся к остановившемуся транспортному средству с опознавательными знаками «Перевозка детей»? (Водитель должен снизить скорость, при необходимости остановиться и пропустить детей).

4.  Какие меры предосторожности должны соблюдать водители при проезде железнодорожных переездов? (Требованиями дорожных знаков, светофоров, разметки, положением шлагбаумов и указаниями дежурного по переезду и убедиться в отсутствии приближающегося поезда).
5.  В каких случаях запрещается въезжать на железнодорожный переезд? (При закрытом шлагбауме, при запрещающем сигнале светофора, при запрещающем сигнале дежурного по переезду, если за переездом образовался затор, если к переезду в пределах видимости приближается поезд).

2. Изложение нового материала (35 минут).

1. Рассказ преподавателя с использованием материалов видеоурока.

Вопрос 1. Правила использования внешних световых приборов в различных условиях движения; действия водителя при ослеплении (10 минут).

Вопрос 2. Обозначение транспортного средства при остановке и стоянке в темное время суток на неосвещенных участках дорог, а также в условиях недостаточной видимости; обозначение движущегося транспортного средства в светлое время суток (10 минут).

Вопрос 3. Порядок использования противотуманных фар и задних противотуманных фонарей; использование фары-искателя, фары-прожектора и знака автопоезда; порядок применения звуковых сигналов в различных условиях движения (10 минут).

Вопрос 4. Ответственность водителей за нарушения правил пользования внешними световыми приборами, звуковыми сигналами, аварийной сигнализацией или знаком аварийной остановки (5 минут).  

     4. Закрепление знаний.

1)     Тестовые задания (в виде презентации) (5 минут)                                                                                                                                                                 2)     Решение тематических задач (20 минут).                                                                         Демонстрация тематических задач с использованием ИМСО «Автошкола МААШ». Модуль «Экзаменационные билеты и тематические задачи» по изучаемому материалу и опрос обучающихся.  

 5. Подведение итогов занятия (5 минут).                                                                                                       5.1. Анализ и оценка деятельности студентов на занятии. Выставление оценок                                                                                                                     5.2. Выдача домашнего задания.  Изучить «Экзаменационные билеты АВ с комментариями» новой редакции.

Пилки для лобзиков Metabo HMB; 1 шт. — 623658000 — Пилки для лобзиков

Немецкие профессиональные электроинструменты и станки.

Компания Metabo была основана в 1924 году и с тех пор занимается производством инструментов. Даже название компании напрямую связано с ними (Metallbohrdreher). Продукция компании сосредоточена в двух местах: Нюрнберге (Германия) и Шанхае (Китай).

Metabo может гордиться созданием первой угловой шлифовальной машины (1950 г.), первого патрона с быстрой фиксацией (1952 г.), первой ударной дрели (1957 г.) и других технологических новшеств.

Производитель Metabo смело говорит, что является одним из лидеров в производстве угловых шлифовальных машин. Информацию о технологических решениях для угловых шлифмашин можно найти в статье «Metabo угловые шлифмашины — прочные, мощные и безопасные».

В 1999 году Metabo приобрела немецкую компанию Elektra Beckum. Компания производила деревообрабатывающие станки, компрессоры, сварочное оборудование, садовые и бытовые приборы. С 2006 года многие устройства Electra Beckum уже продаются под брендом Metabo.

Добавка HMB: клинические и спортивные эффекты и механизмы действия

Пищевая роль метаболита лейцина β-гидрокси β-метилбутирата (HMB)

Abstract

Этот обзор развивает гипотезу о том, что метаболит лейцина, называемый β- гидрокси β- , метилбутират (HMB) играет ключевую роль. роль в метаболизме животных и что при определенных обстоятельствах недостаточное количество HMB либо потребляется с пищей, либо вырабатывается эндогенно для удовлетворения потребностей тканей.Рассмотрены происхождение и метаболизм HMB, включая роль HMB в биосинтезе холестерина. Рассмотрены исследования кормления HMB на животных, которые показывают, что диетические добавки HMB могут улучшить иммунную функцию и здоровье, а также могут увеличить содержание жира в молоке у кормящих животных. Рассмотрены семь исследований на людях, в которых кормили HMB. Результаты исследований как на животных, так и на людях показывают, что добавление HMB к пище безопасно, о чем свидетельствует отсутствие физических побочных эффектов и отсутствие влияния на гематологию и химию крови.Единственным постоянным изменением химического состава крови было снижение холестерина ЛПНП, которое изменилось на 7% ( P <0,01). У людей, проходящих тренировки с отягощениями, добавка HMB увеличивала прирост мышечной массы с 50 до 200%, с аналогичным процентным увеличением силы по сравнению с субъектами без добавок. Влияние HMB на размер и функцию мышц, по-видимому, является результатом уменьшения повреждения мышц, связанного с упражнениями, и распада мышечного белка. Предлагается общая гипотеза о том, что HMB метаболизируется до HMG-CoA в тканях, таких как мышцы, ткань молочной железы и некоторые иммунные клетки, и используется для синтеза холестерина de novo.Во времена стимулированного роста и / или дифференциации. HMG-CoA может ограничивать скорость синтеза холестерина, что может ограничивать рост или функцию клеток. Предполагается, что кормление HMB может обеспечить насыщающий источник цитозольного HMG-CoA для синтеза холестерина и, в свою очередь, обеспечить максимальный рост и функцию клеток.

Ключевые слова

мышцы

иммунные

холестерин

здоровье

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Авторские права © 1997 Опубликовано Elsevier Inc.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

L-лейцин, бета-гидрокси-бета-метилмасляная кислота (HMB) и моногидрат креатина предотвращают индуцированное миостатином подавление мРНК Akirin-1 / Mighty и атрофию миотрубок | Журнал Международного общества спортивного питания

Группа хаски и Зал славы WMEA: гордое объединение

Электронные новости HMB

(Слева направо) Призывники из Зала славы Брэд МакДэвид и Джо Колдуэлл с Брюсом Колдуэллом и женой Брэда, Джени.

Марширующий оркестр Хаски с гордостью объявляет о введении директора ИСБ Брэда МакДэвида в Зал славы Вашингтонской ассоциации музыкальных педагогов на недавнем конгрессе организации, который проводится раз в два года. Также в выдающийся класс этого года был зачислен бывший участник Husky Band Джо (Перелла) Колдуэлл .

Вводный курс Брэда и Джо продолжает гордую историю бывших студентов и сотрудников ИСБ, удостоенных высшей награды штата для преподавателей музыки.

Это бывшие члены и / или сотрудники Husky Band, которые были введены в Зал славы WMEA:

• Фил Эйджер — введен в должность в 1998 году (помощник директора HMB, 1957-64. Также преподавал в школьном округе Эдмондс и был главой музыкального факультета WWU с 1966-1977)
• Билл Бисселл — введен в должность в 1998 году (директор, 1970–1993. Также преподавал в школьном округе Бремертон до своего назначения в Вашингтонский университет)
• Брюс Колдуэлл — введен в должность в 1998 году (помощник директора HMB, 1965-80.Также преподавал в школьном округе Эдмондс с 1964 по 1995 год и был первым исполнительным директором WMEA с 1995 по 2015 год. Брюс был президентом WMEA с 1992 по 1994 год.
• Билл Коул — введен в должность в 1998 году (директор, 1957-69. С 1971 по 79 год занимал должность директора музыкальных групп в WWU. Он также был президентом WMEA с 1966 по 68)
• Рой Каммингс — Введен в должность в 1998 году (член ИСБ с 1958 по 1959 год и был главой факультета джаза UW с 1970 по 2000 год)
• Гарри Накаяма — введен в должность в 1998 году (член ИСБ 1960-64.Также работал помощником директора ИСБ с 1971 по 1979 год и в настоящее время является фотографом пресс-службы ИСБ. Ранее преподавал в Meadowdale HS и Kilo JH)
• Кен Норин — введен в должность в 1998 году (член HMB 1960-64 и сотрудник HMB с 1965-82. Также преподавал в средней школе Shorecrest с 1970-94 и был президентом WMEA 1986-88)
• Рэнди Рокхилл — введен в должность в 1998 г. (член ИСБ 1936-1939 гг., Преподавал в государственных школах Рентона)
• Вальтер Велке — введен в должность в 1998 году (директор, 1929-56.Преподавал в UW в общей сложности 41 год)
• Дейл Глисон — введен в должность 2000 (член ИСБ 1960-64, также преподавал в средней школе Хейзен, а также в общественном колледже Бельвью)
• Моррис Педерсен — введен в должность в 2000 г. (помощник директора ИСБ 1971–1993 и сценарист для ИСБ под руководством Билла Биссела. Также преподавал в Manson HS, Central Kitsap HS и Pierce College)
• Джим Ковач — введен в должность в 2014 г. (участник HMB 1978-1982 гг., Преподавал в Edmonds-Woodway HS, а в настоящее время является директором группы в средней школе Wenatchee)
• Джо Колдуэлл — В 2016 году введен в должность первого почетного призывника.(Член HMB 1959-61; преподавал в школьном округе Эдмондс и был редактором журнала WMEA VOICE в течение последних 20 лет).
• Брэд МакДэвид — введен в должность в 2016 г. (директор, с 1994 г. по настоящее время. Также преподавал в государственных школах в Огайо и Аризоне)

Вашингтонский Зал славы музыкальных педагогов был учрежден советом директоров WMEA в знак признания исключительной поддержки, вдохновения и выдающегося вклада в рост и развитие музыкального образования, как государственного, так и частного, в штате Вашингтон.

Он был основан в 1998 году с уставным классом 125 членов, а через два года был введен в должность дополнительный класс в 70 членов. С тех пор до десяти членов на двухлетний период избираются в Зал славы и вводятся в должность на проходящем раз в два года съезде штата WMEA в Якиме.

В июне 2011 года в Музыкальном здании Jerilyn S. Mcintyre в Центральном Вашингтонском университете была открыта стена признания Зала славы WMEA.

1957, Британский рок и поп

Клеточные и физиологические эффекты пищевых добавок с β-гидрокси-β-метилбутиратом (HMB) и β-аланином у мышей позднего среднего возраста

Abstract

Появляется все больше свидетельств того, что серьезное снижение массы и функции скелетных мышц с возрастом можно смягчить с помощью упражнений и пищевых добавок с технологиями белковых и аминокислотных ингредиентов.Цели этого исследования состояли в том, чтобы изучить влияние катаболита лейцина, бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMB) на миобласты и миотрубки C ₂ C ₁₂ , а также изучить эффекты пищевых добавок с HMB, аминокислота β -аланин и их комбинация на сократимость мышц в доклинической модели пре-саркопении. В миотрубках C ₂ C ₁₂ HMB увеличивал высвобождение кальция в саркоплазматическом ретикулуме (SR) вне контроля носителя в присутствии всех протестированных агонистов SR (KCl, P <0.01; кофеин, P = 0,03; иономицин, P = 0,03). HMB также улучшил жизнеспособность миобластов C ₂ C ₁₂ (25 мкМ HMB, P = 0,03) и увеличил пролиферацию (25 мкМ HMB, P = 0,04; 125 мкМ HMB, P <0,01). Кроме того, было проведено исследование ex vivo мышечной сократимости на EDL и камбаловидной мышце у самцов мышей C57BL / 6nTac в возрасте 19 месяцев. В течение 8 недель мышей кормили контрольной диетой AIN-93M, диетой с HMB, диетой с β -аланином или диетой с HMB и β -аланином.У мышей, получавших β -аланин, EDL-мышца показала увеличение максимальной абсолютной силы на 7% по сравнению с контрольной диетой (202 ± 3 против 188 ± 5 мН, P = 0,02). При субмаксимальной частоте стимуляции (20 Гц) EDL у мышей, получавших HMB плюс β -аланин, показал увеличение абсолютной силы на 11% (88,6 ± 2,2 против 79,8 ± 2,4 мН, P = 0,025) и увеличение на 13%. удельная сила (12,2 ± 0,4 против 10,8 ± 0,4 Н / см ² , P = 0,021). Также в EDL-мышце β -аланин увеличивал скорость развития силы на всех тестируемых частотах (P <0.025), в то время как HMB сокращал время достижения пиковой сократительной силы (TTP) со значительным эффектом при 80 Гц (P = 0,0156). В камбаловидной мышце все экспериментальные диеты были связаны со снижением ВДП по сравнению с контрольной диетой. Наши результаты подчеркивают положительное влияние добавок HMB и β -аланина на функцию скелетных мышц у стареющих мышей.

Образец цитирования: Вальехо Дж., Спенс М., Ченг А.Л., Бротто Л., Эденс Н.К., Гарви С.М. и др. (2016) Клеточные и физиологические эффекты пищевых добавок с β -гидрокси- β -метилбутират (HMB) и β -аланин у мышей позднего среднего возраста.PLoS ONE 11 (3): e0150066. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150066

Редактор: Ласло Чернох, Университет Дебрецен, ВЕНГРИЯ

Поступило: 11 мая 2015 г .; Одобрена: 9 февраля 2016 г .; Опубликовано: 8 марта 2016 г.

Авторские права: © 2016 Vallejo et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Финансирование этого проекта было предоставлено Abbott Nutrition. Финансирующие организации не участвовали в сборе и анализе данных. SMG является сотрудником Abbott Nutrition, подразделения Abbott Laboratories, Inc. Во время исследования NKE также была сотрудником Abbott Nutrition. И SMG, и NKE сыграли свою роль в разработке исследования и подготовке рукописи.Таким образом, спонсор Abbott Nutrition участвовал в разработке исследования и подготовке рукописи, но не участвовал в сборе и анализе данных или принятии решения о публикации.

Конкурирующие интересы: SMG является сотрудником Abbott Nutrition, подразделения Abbott Laboratories, Inc. На момент исследования NKE также была сотрудником Abbott Nutrition. Финансирование этого проекта было предоставлено Abbott Nutrition. Это не меняет приверженности авторов политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Старение приводит к прогрессирующему снижению многих физиологических процессов, включая когнитивные функции [1], основной уровень метаболизма [2], сердечный выброс [3], легочную функцию [4] и нервно-мышечную активность [5]. Особенно изнурительным является резкое снижение массы и функции скелетных мышц с возрастом, которое наблюдается у подгруппы пожилых людей, также известное как саркопения. Саркопения является одним из факторов, вызывающих до 85,6% случаев инвалидности у пожилых мужчин и 26% у пожилых женщин, что составляет целых 26.Затраты на здравоохранение в 2000 г. составили 2 миллиарда долларов [6]. Саркопения характеризуется резкими изменениями в составе тела, включая постепенную потерю скелетной мышечной ткани и замену жировой тканью и фиброзом, что приводит к снижению мышечной силы и мощности [7,8]. Слабость и хрупкость мышц приводят к повышенному риску падений и травм среди пожилых людей, с увеличением числа случаев инвалидности, потери независимости, снижения качества жизни и множества вторичных заболеваний [8,9].Исследования на мышах, крысах и людях показывают, что эти возрастные изменения мышечной силы многомерны и только частично могут быть объяснены атрофией и потерей мышечной ткани [10,11]. Дополнительные факторы, способствующие мышечной слабости, включают потерю и дисморфологию двигательных единиц [12], уменьшение площади поперечного сечения миофибрилл, увеличение неконтрактильной ткани, снижение активности сателлитных клеток [13] и изменение миоклеточного гомеостаза кальция [14-18]. Эти независимые от размера факторы подчеркивают важность поддержания качества мышц (силы на единицу мышечной массы) во время старения, а не только количества мышц.

Упражнения с отягощениями — эффективное средство против потери мышечной массы и силы у пожилых людей и лиц с саркопенией [8,19–22]. Однако регулярные физические упражнения не всегда доступны пожилым людям, которые могут быть более подвержены травмам и длительному выздоровлению, и особенно людям с ограниченными возможностями передвижения или другими хроническими заболеваниями [8,23]. Кроме того, были предприняты фармакологические и диетические вмешательства для противодействия потере мышечной массы с возрастом [8,24,25]. Появляется все больше данных, показывающих, что пищевые добавки с белком [26], аминокислотами с разветвленной цепью (BCAA) [27] и даже метаболитами аминокислот [28] могут уменьшить саркопению, если их принимать отдельно или в сочетании с тренировками с отягощениями.Однако механизмы действия и синергизм некоторых из этих вмешательств до конца не изучены.

Одним из многообещающих диетических вмешательств является бета-гидрокси-бета-метилбутират (HMB), метаболит лейцина, незаменимого BCAA. Подсчитано, что 5% метаболизма лейцина приводит к продукции HMB in vivo [29], в то время как большинство катаболитов лейцина шунтируются в сторону производства HMG-CoA, который либо превращается в ацетил-CoA для цикла трикарбоновой кислоты, либо возможно, используется для биосинтеза холестерина [30].На крысах Pinheiro и др. Продемонстрировали, что добавление HMB увеличивало выработку силы тетанической силы in situ икроножной мышцы и устойчивость к утомлению [31]. Также на крысах Alway et al продемонстрировали, что HMB усиливает активность и пролиферацию сателлитных клеток после разгрузки мышц [32]. Кроме того, сообщалось, что лечение HMB воздействует на маркеры обмена мышечного белка, снижая катаболизм мышц за счет модуляции убиквитин-протеасомного протеолитического пути и стимулируя синтез мышечного белка через пути mTOR / p70S6k, IGF, MAPK / ERK или PI3 / Akt [ 32–38].В культуре миобластов было показано, что HMB индуцирует экспрессию маркера пролиферации MyoD и маркеров дифференцировки MEF2 и миогенина [34].

HMB первоначально получил распространение в качестве диетической добавки благодаря исследованиям спортивных результатов у физически активных молодых людей мужского и женского пола [39]. С тех пор было продемонстрировано, что HMB способствует увеличению мышечной массы, силы, мощности или физической работоспособности или уменьшению атрофии скелетных мышц у пожилых людей [40–44]. Добавка HMB также предотвращала потерю мышечной массы в исследовании на людях 10-дневного постельного режима [45] и показала аналогичную эффективность на экспериментальных моделях раковой кахексии [37,46–48].С другой стороны, несколько исследований, в частности, с участием силовых спортсменов, не подтверждают эти результаты и могут отражать различия в дозах и продолжительности приема HMB или общем потреблении белка [49–51].

Еще одним обнадеживающим диетическим ингредиентом для противодействия возрастной потере силы является бета-аланин ( β -аланин) — непротеиногенная аминокислота, наиболее распространенная в центральной нервной системе и скелетных мышцах. В мышцах β -аланин и _L -гистидин объединяются с образованием миопротекторного дипептида карнозина [52,53].Было показано, что в качестве пищевой добавки β -аланин повышает способность к физическим нагрузкам и порог утомляемости как у молодых [54], так и у пожилых людей [55,56], возможно, за счет усиленного интрамиофибриллярного буфера карнозина H ⁺ во время упражнений. -индуцированный метаболический ацидоз. Недавнее исследование мышечных миофибрилл с кожей человека [57], а также исследования на крысах [58] и других видах, не относящихся к млекопитающим [59], предоставили убедительные доказательства того, что карнозин усиливает внутреннюю чувствительность сократительного аппарата к кальцию в дозе зависимый образ.Кроме того, повышенные внутримышечные уровни β -аланина и карнозина, достигнутые с помощью пищевых добавок у мышей, коррелировали как с повышенным сопротивлением усталости в камбаловидной мышце, так и с усилением связи возбуждения-сокращения (ЕС) в мышце длинного разгибателя пальцев (EDL) через сдвиг влево (увеличение силы на 10–31%) кривой «сила-частота» [60]. Однако в некоторых исследованиях добавка β -аланина не показала влияния на концентрацию карнозина в мышцах или способность к физической нагрузке [61–63].

Основная цель настоящего исследования состояла в том, чтобы проверить взаимодействие между диетическим HMB и добавкой β -аланина на мышечную силу, качество мышц, сопротивляемость и восстановление после утомляющих стимуляций на мышиной модели пре-саркопении. Мы предсказали, что диетическое вмешательство с HMB увеличит мышечную силу за счет улучшения накопления миофибриллярного белка, в то время как β -аланин улучшит качество мышц, их сопротивляемость и восстановление после усталости за счет улучшенного сцепления E-C.Мы также выдвинули гипотезу о дополнительном преимуществе одновременного приема HMB и β -аланина, в частности, в отношении мышечной силы и качества мышц. Мы также проверили, влияет ли лечение HMB на пролиферацию и обработку внутриклеточного кальция в дифференцированных мышиных мышечных трубках C ₂ C ₁₂ .

Материалы и методы

Жизнеспособность и пролиферация клеток

Чтобы оценить влияние HMB на жизнеспособность миобластов C ₂ C ₁₂ , был проведен анализ исключения трипанового синего.C ₂ C ₁₂ миобласты высевали в непокрытые 6-луночные планшеты с плотностью 1600 клеток на см ² и синхронизировали G ₀ / G ₁ в течение 24 часов в условиях депривации сыворотки. [1% фетальной бычьей сыворотки (FBS) в DMEM]. Затем среду заменяли на среду пролиферации с низким содержанием сыворотки (3% FBS) или нормальной сывороткой (10% FBS), содержащую 25 или 125 мкМ свободной кислоты HMB или эквивалентный объем PBS (контроль носителя). После 48 часов и 72 часов пролиферации клетки трипсинизировали, окрашивали трипановым синим (каталог № 16, MP Biomedicals, Санта-Ана, Калифорния, США) и подсчитывали вручную с помощью гемоцитометра (каталог № 1492, Hausser Scientific, Хоршам, Пенсильвания, США). США).Жизнеспособность клеток рассчитывалась как процент неокрашенных клеток [64,65]. Опыт повторяли 3 раза. Для определения влияния HMB на пролиферативную способность миобластов C ₂ C ₁₂ использовали автоматический счетчик клеток Scepter ™ (EMD Millipore, Billerica, MA, USA). C ₂ C ₁₂ миобласты помещали в 24-луночные планшеты без покрытия с плотностью 1600 клеток на см ² и синхронизировали с G ₀ / G ₁ в течение 24 часов в условиях депривации сыворотки. (1% FBS в DMEM).Затем среду переключали на среду для пролиферации (10% FBS в DMEM) с добавлением 25 мкМ или 125 мкМ HMB или эквивалентного объема PBS. Через 48 часов пролиферации клетки обрабатывали трипсином и подсчитывали, используя анализ Scepter ™. Для получения наиболее точного подсчета клеток результаты были ограничены, чтобы исключить клеточный дебрис [66]. HMB в свободной форме (каталог № 55453, Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) использовался во всех исследованиях клеточных культур, тогда как моногидрат кальция HMB использовался в исследовании на животных in vivo.Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Fura-2 мониторинг внутриклеточного Ca2

Для количественного измерения внутриклеточного [Ca ²⁺ ] в культивируемых миобластах мы использовали методы, ранее разработанные и описанные лабораторией Brotto [64,67]. C ₂ C ₁₂ миобласты помещали на 25 мм ² стеклянных покровных стекол с плотностью 8000 клеток на см ² и позволяли дифференцироваться в мышечные трубки, обрабатывая клетки в течение 7 дней средой для дифференцировки (2.5% лошадиной сыворотки в DMEM), содержащий 25 мкМ или 125 мкМ HMB или контрольный носитель. После 7 дней дифференцировки мышечные трубки загружали 4 мкМ Fura-2-AM в течение 40 минут, затем промывали, после чего Fura-2 давали деэтерифицироваться. Поскольку артефакты движения миотрубок связаны с внутриклеточным высвобождением Ca ²⁺ , применяли 10 мкМ N-бензил-п-толуолсульфонамида (Sigma-Aldrich), специфического ингибитора миозина II, на 20 мин. Затем клетки помещали в инвертированный микроскоп, оснащенный спектрофлуориметром с двумя длинами волн (возбуждение при 340 нм и 380 нм) (Photon Technology International, Бирмингем, Нью-Джерси, США), который использовали для определения изменения величины внутриклеточного Ca ^{2. +} переходных процессов в ответ на KCl, кофеин и иономицин.В частности, клетки перфузировали в течение 2 минут каждую 80 мМ KCl, затем 20 мМ кофеина и, наконец, 10 мкМ иономицина. Клетки промывали физиологическим буфером и позволяли восстановиться до нормального уровня кальция в покое между каждой химической стимуляцией. Использование KCl, кофеина и иономицина дает информацию об индуцированном деполяризацией высвобождении кальция, индуцированном кальцием высвобождении кальция и общем накоплении кальция в саркоплазматическом ретикулуме [68], соответственно. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Животные

Все экспериментальные процедуры были одобрены институциональными комитетами по уходу и использованию животных Университета Миссури в Канзас-Сити (Канзас-Сити, Миссури, США).Девственные самцы мышей C57BL / 6NTac (8 мышей в возрасте 14, 14,5, 15, 15,5, 16 и 16,5 месяцев; всего 48 мышей) были приобретены у Taconic Farms, Inc. (Germantown, NY, США) и размещены индивидуально с ad libitum доступ к пище и воде и световой цикл 12 ч / день на время исследования. Все мыши получали нормальную пищу во время акклиматизации в помещении и в возрасте до 17 месяцев с последующими 2 неделями акклиматизации к контрольной очищенной диете (диета AIN-93M, каталог TD.94048, Harlan Laboratories, Inc., Индианаполис, Индиана, США). На этом этапе мышей распределяли по 4 экспериментальным группам, получавшим контрольную очищенную диету, очищенную диету, содержащую моногидрат кальция HMB (514 мг / кг веса тела, далее именуемую HMB), очищенную диету, содержащую β -аланин (411 мг / кг). bw) или комбинацию HMB и β -аланина (HMB: 514 мг / кг; β -аланин: 411 мг / кг bw). HMB (ЛОТ № DO42364, Lonza Group Ltd., Базель, Швейцария) и β -аланин (ЛОТ № 109782, Yuki Gosei Kogyo Co., Ltd., Токио, Япония) были предоставлены Abbott Nutrition (Колумбус, Огайо, США). Мышей кормили экспериментальным рационом в течение 8 недель. Потребление пищи и массу тела регистрировали ежедневно в течение первой недели приема пищевых добавок (для проверки потребности в парном питании), а затем — еженедельно. В кормлении пар не было необходимости, и ни одна мышь не погибла в ходе исследования. После периода диетического вмешательства мышей умерщвляли смещением шейных позвонков, а EDL и камбаловидную мышцу осторожно удаляли для анализа сократимости, как сообщалось ранее [69].Возраст всех мышей при умерщвлении составлял 19 месяцев.

Иссеченные неповрежденные EDL и камбаловидные мышцы немедленно помещали в чашку, содержащую раствор Рингера HEPES (143 мМ NaCl; 5 мМ KCl; 1,8 мМ MgCl ₂ ; 10 мМ HEPES; 2,5 мМ CaCl ₂ ; pH 7,40) с 10 мМ глюкоза. Этот раствор непрерывно аэрировали 100% O ₂ . Этот экспериментальный раствор для купания использовался для жесткого контроля pH, и наши результаты показывают, что максимальные тетанические силы находятся в пределах диапазона нормированных сил, указанных для растворов для купания, которые, возможно, используют бикарбонат и фосфат и смесь CO ₂ и O ₂ [ 69].Эти результаты также согласуются с нашими предыдущими исследованиями эффектов гипоксии и вызванной гипоксией утомляемости диафрагмальных мышц у мышей [70]. EDL и камбаловидную мышцу устанавливали вертикально между двумя стимулирующими платиновыми электродами (Монровия, Калифорния, США) и погружали в ванну объемом 25 мл, содержащую раствор Рингера. Через сухожилия мышцы подвешивались к регулируемым датчикам изометрической силы над камерами и прикреплялись к основанию тканевой опоры внутри камер.Аналоговый выходной сигнал датчика силы был оцифрован, сохранен и проанализирован с помощью программного обеспечения PowerLab ^® (ADInstruments Inc., Колорадо-Спрингс, Колорадо, США). Для каждой мышцы стимулирующее напряжение обеспечивалось двойным импульсным цифровым стимулятором S8800 (Grass Products, West Warwick, RI, USA) (длительность импульса 1 мс; продолжительность последовательности 500 мс). Оптимальную длину мышцы ( L, ₀ ) сначала определяли для каждой мышцы путем удлинения мышцы до тех пор, пока тетаническая стимуляция с частотой 100 Гц с интервалом в 1 минуту не дала максимальной силы. Уравновешивание : Затем неповрежденным EDL и камбаловидной мышцам был предоставлен 30-минутный период уравновешивания, в течение которого их стимулировали парами чередующихся высокочастотных (80 Гц) и низкочастотных (20 Гц) импульсных последовательностей, вводимых с периодичностью 1 мин. имитировать нормальную мышечную активность. Использование предложенной парадигмы стимуляции помогает изучить относительный вклад сократительных белков (80 Гц) и саркоплазматического ретикулума (20 Гц) в сократительную функцию [69,71]. Соотношение сила-частота : После уравновешивания EDL и камбаловидная мышца подвергались стимуляции с частотами в диапазоне от 1 до 130 Гц с периодичностью 1 мин для создания зависимости силы от частоты (FF). Пиковая сила каждого сокращения при различных частотах стимуляции использовалась для построения графика зависимости силы от частоты. Усталость : Затем, чтобы вызвать утомление, EDL и камбаловидную мышцу стимулировали парами чередующихся последовательностей импульсов высокой (80 Гц) и низкой (20 Гц) частоты с периодичностью 1 сек в течение 5 мин.Степень утомления определяли как процент силы, остающейся после 5-минутного протокола утомления (относительно силы на 80 Гц и 20 Гц непосредственно перед утомляющей стимуляцией). Восстановление после утомления : Сразу после протокола утомления EDL и камбаловидной мышце был предоставлен 30-минутный период восстановления, в течение которого применялись чередующиеся стимулирующие серии высокой (80 Гц) и низкой (20 Гц) частоты с периодичностью 1 мин. . Затем мышцам был предоставлен второй 30-минутный период восстановления с добавлением 5 мМ кофеина в ванну камеры для измерения общей связи ЭК в течение периода восстановления [14, 68, 69].Хотя кофеин может оказывать свое действие через комбинацию участков внутри мышцы (утечка Ryr Ca ²⁺ , скорость накачки SR Ca ²⁺ , чувствительность сократительного механизма Ca ²⁺ ), уровень восстановления мышечной силы наблюдается в присутствие кофеина указывает на то, что эффекты, вероятно, связаны с доступностью Ca ²⁺ во время связывания EC [72,73]. Данные о силе : Мышечная сила представлена ​​как абсолютная сила (мН) и сила, нормализованная к физиологической площади поперечного сечения мышц (Н / см ² ), как ранее сообщалось нашей группой [69,74,75]. Данные наклона : Наклон нарастающего фронта мышечных сокращений измеряли через 0–31 мс после начала пика. Время до пика : Рассчитано как время (мс), которое потребовалось для достижения пика силы с начала сокращения мышцы. Данные по тау-белку : тау-белок рассчитывали из 90% -0% высоты пика во время фазы расслабления мышечных сокращений. Все данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего.

Статистический анализ

Исследования клеток in vitro были статистически проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с учетом основного эффекта с P <0,05, считающимся значимым.

Сократимость.

Точки данных, которые находились на расстоянии трех стандартных отклонений от среднего значения, считались выбросами и удалялись из набора данных. Тест Колмогорова-Смирнова был проведен для проверки предположения о нормальности исходных переменных. Все переменные прошли тест на нормальность при уровне значимости 0.05. Был применен подход смешанной модели для проверки эффекта лечения с учетом повторных измерений на одном и том же человеке. Парные контрасты были оценены и проверены на значимость между различными видами лечения. Из-за множественных сравнений контрастов для установления статистической значимости использовался более строгий альфа-уровень 0,025.

Результаты

Жизнеспособность миобластов C ₂ C ₁₂ в условиях низкого сывороточного / клеточного голодания и нормальной сыворотки значительно повысилась после 48 часов пролиферации в присутствии 25 мкМ HMB по сравнению с контролем (рис. 1A и 1B). .Мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения жизнеспособности клеток после 48 часов пролиферации в этих условиях. Обработка HBM в дозе 125 мкМ не влияла на жизнеспособность клеток. Обе дозы HMB (25 мкМ и 125 мкМ) усиливали пролиферацию миобластов C ₂ C ₁₂ через 48 часов в среде, содержащей 10% сыворотки (рис. 1C). Эти результаты были получены с использованием автоматического счетчика клеток.

Рис. 1. ГМБ увеличивает жизнеспособность и пролиферацию клеток миобластов C ₂ C ₁₂ .

C ₂ C ₁₂ миобластов обрабатывали 25 мкМ или 125 мкМ свободной кислоты HMB или контрольным носителем. Жизнеспособность клеток оценивали через 48 и 72 часа пролиферации с использованием анализа исключения трипанового синего. Эксперименты проводились в условиях как низкой сыворотки (A), так и нормальной сыворотки (B), (контроль, n = 6; 25 мкМ HMB, n = 3; 125 мкМ HMB, n = 3, * означает значительную разницу по сравнению с контролем: 3% FBS, P = 0,044; 10% FBS, P = 0,031, односторонний дисперсионный анализ). C) C ₂ C ₁₂ миобластов обрабатывали 25 мкМ или 125 мкМ HMB или контрольным носителем в течение 48 часов в среде для пролиферации (10% FBS), после чего подсчитывали общее количество жизнеспособных клеток при удалении клеточного мусора с помощью Scepter ™ Автоматический счетчик клеток (контроль, n = 6; 25 мкМ HMB, n = 3; 125 мкМ HMB, n = 3, * обозначает значимость по сравнению с контролем: 25 мкМ HMB, P <0.042; 125 мкМ HMB, P <0,01, однофакторный дисперсионный анализ).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150066.g001

Затем мы контролировали уровни внутриклеточного кальция ([Ca ⁺² ] _i ) в условиях покоя, после чего последовательно устанавливали саркоплазматический ретикулум (SR). Стимуляция высвобождения Ca ⁺² с использованием 80 мМ KCl, 20 мМ кофеина и 10 мкМ иономицина в дифференцированных миобластах C ₂ C ₁₂ (рис. 2A). Миобласты дифференцировались в течение 7 дней в многоядерные миотрубки в присутствии как 25 мкМ, так и 125 мкМ HMB.Миотрубки, дифференцированные с помощью 25 мкМ HMB, показали небольшое, но значительное увеличение уровня покоя цитозольного кальция по сравнению с контрольными мышечными трубками (P <0,01, однофакторный дисперсионный анализ) (рис. 2B). Эти миотрубки также выделяли значительно больше кальция в ответ на иономицин (P = 0,026, односторонний дисперсионный анализ), но демонстрировали аналогичные ответы на KCl и кофеин по сравнению с контрольными мышечными трубками (рис. 2С). Кроме того, 125 мкМ HMB был способен вызывать в целом значительно большее высвобождение SR Ca ⁺² для всех трех агонистов, что описывается как изменение от исходного уровня соотношения Fura-2 по сравнению с контролем (KCl, P <0.01; Кофеин, P = 0,032; Иономицин, P = 0,03, однофакторный дисперсионный анализ) (рис. 2С). Также заметно, что в контрольных условиях наблюдается значительное снижение высвобождения кальция из последовательных вызовов клеток трем высвобождающим кальций агентам (рис. 2С, сравнения в скобках). Напротив, обе обработки 25 мкМ 125 мкМ HMB избавили клетки от этого снижения высвобождения кальция (фиг. 2C, сравнения в скобках).

Рис. 2. HMB увеличивает вызванное деполяризацией высвобождение кальция, вызванное кофеином высвобождение кальция из SR и общее накопление кальция в мышечных трубках C ₂ C ₁₂ .

Кальциевые ответы зрелых миотрубок C ₂ C ₁₂ , дифференцированных в течение 7 дней в присутствии 25 мкМ или 125 мкМ HMB или носителя, измеряли после перфузии 80 мМ KCl, 20 мМ кофеина и 10 мкМ иономицина. A) Типичные кальциевые ответы от контроля, обработанных 25 мкМ HMB и 125 мкМ HMB C ₂ C ₁₂ миотрубок, измеренные с помощью Fura-2. Стрелки указывают время перфузии клеток KCl, кофеином и иономицином, а также участки вымывания между химическими стимуляциями.B) Средние уровни цитозольного кальция в состоянии покоя в контроле, обработанных 25 мкМ HMB и 125 мкМ HMB C ₂ C ₁₂ мышечных трубок (n = 15–20 клеток, * означает P <0,01 по сравнению с контролем, однофакторный дисперсионный анализ) . C) Пиковое изменение соотношения Fura 2 от исходного уровня в контроле, обработанных 25 мкМ HMB и 125 мкМ HMB, мышечных трубок C ₂ C ₁₂ миотрубок в ответ на лечение KCl, кофеином и иономицином. (n = 15–20 клеток, * обозначает значимость по сравнению с контролем: KCl, P <0,01; кофеин, P = 0,032; иономицин, P = 0.03, односторонний дисперсионный анализ). Мышечные трубочки, обработанные HMB, но не контрольные, были способны поддерживать устойчивое высвобождение кальция между первой и последней химической обработкой, поскольку изменение значений соотношения Fura 2 (C) значительно снижалось между обработкой 80 мМ KCl и 10 мкМ иономицином в контрольных мышечных трубках. но не в клетках, обработанных 25 и 125 мкМ HMB (соотношение Fura-2 при обработке 80 мМ KCl по сравнению с 10 мкМ иономицином в той же группе: Соотношение Δ Fura-2 (C): 25 мкМ HMB-P = 0,522, 125 мкМ HMB: P = 0,177, Контроль-P = 0,017)

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0150066.g002

В общей сложности 48 мышей-самцов позднего среднего возраста получали контрольную очищенную диету, диету с добавлением HMB, диету с β -аланином или диету с комбинацией HMB и β -аланин. На рис. 3А показан график исследования диетических вмешательств, проведенного на этих мышах. В течение 8 недель приема пищевых добавок не было значительных различий в массе тела или потреблении пищи в 4 экспериментальных группах.Разница в средней массе тела во всех четырех экспериментальных группах составляла 42,8–44,1 г. В конце исследования влажный вес мышц и оптимальная длина не показали различий в четырех экспериментальных группах (Таблица 1).

Рис. 3. Краткое изложение графика исследования in vivo и анализа сократимости мышц.

A) Схематическое изображение исследования диетического вмешательства, проведенного на 48 самцах мышей C57BL / 6nTac. Все мыши были 19 месяцев в возрасте на момент умерщвления для исследований сокращения.B) Репрезентативное отслеживание данных силы из анализа ex vivo сократимости, полученного для одной мышцы ( ось X, : время; ось Y, : сила). Уравновешивание, утомление и восстановление после утомления выполняются с использованием чередования высоких (80 Гц) и низких (20 Гц) частот стимуляции. Врезка : Увеличенное изображение утомляющих стимуляций с использованием чередования высоких (80 Гц) и низких (20 Гц) частот стимуляции.

https://doi.org/10.1371 / journal.pone.0150066.g003

В анализ сократимости было включено 12 животных на группу, при этом анализировались 24 EDL-мышцы и 24 камбаловидные (SOL) мышцы на группу (тестировали мышцы обеих задних конечностей на мышь). Репрезентативные данные эксперимента по сократимости показаны на рис. 3В. Зависимость силы от частоты для EDL-мышц из группы β -аланина показала, что абсолютная сила сокращений на 9% выше при 1 Гц (P = 0,009) по сравнению с контрольными мышцами (рис. 4A).Совместное введение с пищей HMB и β -аланина увеличивало генерацию как абсолютной, так и специфической субмаксимальной (частота стимуляции 20 Гц) силы в EDL-мышце на 11,0% (88,6 мН ± 2,2 мН против 79,8 мН ± 2,4 мН, P = 0,025) 13,4% (12,2 Н / см2 ± 0,4 Н / см2 против 10,8 Н / см2 ± 0,4 Н / см2, P = 0,021), соответственно, по сравнению с контролем (рис. 4A и 4B). Кроме того, максимальная тетаническая сила в мышце EDL была на 7,3% выше (202,0 мН ± 3,4 мН против 188,2 мН ± 4,6 мН, P = 0,023) у мышей, получавших только β -аланин (рис. 4A).В камбаловидной мышце, однако, не было обнаружено значительных изменений в абсолютной или удельной силе (рис. 4C и 4D).

Рис. 4. Зависимость силы EDL и камбаловидной мышцы от частоты.

Сокращение мышц стимулировали с увеличивающейся частотой от 1 до 130 Гц, чтобы определить соотношение силы и частоты. А) Абсолютная сила мышцы EDL. Вставка : Необработанные данные для 1 Гц, 20 Гц и максимальных тетанических сокращений (* обозначает P <0,025, HMB + β -аланин по сравнению с контрольной диетой; ^a обозначает P <0.025, β -аланин по сравнению с контрольной диетой). B) Удельная сила EDL для мышц (* обозначает P <0,025, HMB + β -аланин по сравнению с контрольной диетой). В) Абсолютная сила камбаловидной мышцы. D) Удельная сила камбаловидной мышцы. (EDL: контроль-n = 24 мышцы, HMB-n = 23 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -аланин-n = 24 мышцы. SOL: Контроль-n = 23 мышцы, HMB-n = 24 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -alanine-n = 24 мышцы).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150066.g004

Мы также проанализировали кинетические свойства отдельных мышечных сокращений на основе соотношения силы и частоты, включая скорость нарастания мышечного сокращения и время, необходимое для достижения пиковая сократительная сила. Скорость или крутизна развития силы в мышцах EDL из группы β -аланина была значительно увеличена на всех испытанных частотах стимуляции по сравнению с контрольной диетой (1–130 Гц, P <0.025) (рис. 5А). Сокращения с подергиванием (1 Гц) и максимальной силой (80 Гц), которые показали значительно увеличенную силу в группе β -аланин, показали увеличение скорости подъема на 12% и 4%, соответственно (Контроль против β — аланин-сокращение: 1,08 ± 0,03 мН / мс против 1,22 ± 0,02 мН / мс, P = 0,0022. Контроль против β -аланин-80 Гц: 1,56 ± 0,04 против 1,70 ± 0,03, P = 0,0072) (рис. 5A) ). Мышцам EDL из группы HMB потребовалось на 58 миллисекунд меньше времени для достижения максимальной максимальной сократительной силы при 80 Гц по сравнению с контролем (366.0 ± 20,0 мс против 423,9 ± 10,9 мс, P = 0,0156) (рис. 5B). В камбаловидной мышце не было обнаружено значительных различий в наклоне сокращений между любой из экспериментальных групп (рис. 5D). Однако время, необходимое для достижения максимальной сократительной силы, было сокращено во всех группах вмешательства (рис. 5E). Один только HMB сокращал время достижения пика на стимулирующих частотах 50–90 Гц (Контроль против HMB-50 Гц: 520 ± 2 мс против 514 ± 1 мс, P = 0,0238; 70 Гц: 522 ± 2 мс против 513 ± 2 мс, P = 0,0009; 80 Гц: 524 ± 2 мс vs.518 ± 1 мс, P = 0,0246; 90 Гц: 521 ± 2 мс против 511 ± 1 мс, P = 0,0004), в то время как сокращения от групп β -аланин и HMB + β -аланин достигли пика быстрее при 80–90 Гц (Контроль против β -аланин -80 Гц: 524 ± 2 мс против 518 ± 2 мс, P = 0,0108; 90 Гц: 521 ± 2 мс против 513 ± 2 мс, P = 0,0029) и только 90 Гц (контроль против HMB + β -аланин -90 Гц: 521 ± 2 против 513 ± 2 мс, P = 0,0140), соответственно (рис. 5E). Не было обнаружено значительных различий в релаксационных свойствах (тау) EDL (рис. 5C) или камбаловидной мышцы в экспериментальных группах (рис. 5F).

Рис. 5. Кинетические свойства индивидуальных сокращений EDL и камбаловидной мышцы.

A) Скорость создания силы индивидуальных сокращений EDL-мышцы при частотах стимуляции в диапазоне от 1 до 130 Гц ( ^a обозначает значительную разницу в группе β -аланина по сравнению с контрольной диетой. все проверенные частоты стимуляции). B) Время достижения максимальной сократительной силы при сокращениях EDL-мышцы, стимулированной с частотой 1–130 Гц (* обозначает значительную разницу в диете HMB по сравнению с контрольной диетой).C) Постоянная времени (тау) в убывающем экспоненциальном приближении к хвосту сокращений EDL-мышцы, стимулированной с частотой 1–130 Гц. D) Скорость выработки силы отдельными сокращениями камбаловидной мышцы при частотах стимуляции в диапазоне от 1 до 130 Гц ( ^a обозначает значительную разницу в группе β -аланина по сравнению с контролем. E) Время достижения пика сократимости сила сокращений камбаловидной мышцы, стимулированной с частотой 1–130 Гц (* означает значительную разницу в диете HMB по сравнению с контрольной диетой, ^a означает значительную разницу в группе β -аланина по сравнению с контролем, ^b обозначает значительную разницу в группе HMB + β -аланина по сравнению с контролем).F) Постоянная времени (тау) затухающего экспоненциального соответствия хвосту сокращений камбаловидной мышцы, стимулированных с частотой 1–130 Гц. (EDL: Контроль-n = 24 мышцы, HMB-n = 23 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -аланин-n = 24 мышцы. SOL: Контроль-n = 24 мышцы, HMB-n = 24 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -alanine-n = 24 мышцы).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150066.g005

Мы также исследовали устойчивость к утомлению и восстановление после утомительных сокращений как EDL, так и камбаловидной мышцы.Никаких изменений не наблюдалось в мышце EDL (рис. 6A – 6D). Хотя это и не является статистически значимым, наблюдалась тенденция к снижению утомляемости камбаловидной мышцы в группах HMB и β -аланина, и особенно их комбинации (HMB + β -аланин: увеличение силы после утомления на 5,1% по сравнению с силой до утомления, по сравнению с контрольной диетой, P = 0,049) при субмаксимальной частоте стимуляции (20 Гц) по сравнению с контрольной диетой (рис. 6E).

Рис. 6. Утомляющая стимуляция и восстановление после утомления EDL и камбаловидной мышцы.

Переменные частоты 80 Гц и 20 Гц использовались для утомления мышц с перерывами в течение 5 минут с периодичностью в одну секунду. Затем периодичность или интервал между стимуляциями увеличивали до одной минуты, чтобы обеспечить восстановление силы в отсутствие и в присутствии 5 мМ кофеина. A и B) Усталость и восстановление EDL, соответственно, с использованием низкой частоты стимуляции 20 Гц. D) Усталость EDL и восстановление, соответственно, с использованием высокой частоты 80 Гц. E и F) Усталость и восстановление Soleus, соответственно, с использованием низкой частоты стимуляции 20 Гц ( @ означает P = 0.049). G и H) Усталость Soleus и восстановление, соответственно, с использованием высокой частоты 80 Гц. (EDL: контроль-n = 22 мышцы, HMB-n = 23 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -аланин-n = 24 мышцы. SOL: Контроль-n = 22 мышцы, HMB-n = 24 мышцы, β -аланин-n = 24 мышцы, HMB + β -alanine-n = 22 мышцы).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150066.g006

Обсуждение

В этом исследовании мы исследовали влияние как лечения HMB на культивируемые мышечные клетки, так и диетических добавок HMB на сократимость мышц у мышей позднего среднего возраста.В последнем исследовании мы также проверили взаимодействие с β -аланином. Хорошо охарактеризованным признаком старения скелетных мышц является снижение способности к регенерации мышц после травмы или упражнений, и, по крайней мере, одним из факторов, способствующих этому, является прогрессирующая потеря связанных с регенерацией сателлитных клеток и миобластов [76,77]. Эти резидентные мононуклеарные клетки могут быть смоделированы в клеточной культуре путем изучения изолированных мышиных миобластов C ₂ C ₁₂ . Мы обнаружили, что лечение HMB увеличивало пролиферацию миобластов C ₂ C ₁₂ (рис. 1C).Кроме того, лечение HMB увеличивало жизнеспособность миобластов C ₂ C ₁₂ даже при неблагоприятных условиях снижения уровня сыворотки (рис. 1A и 1B). Взятые вместе, благотворное влияние HMB на жизнеспособность и пролиферацию миобластов в культуре клеток согласуется с ролью in vivo в улучшении регенеративной способности миофибрилл в процессе старения, как было отмечено в доклиническом исследовании разгрузки мышц на модели крыс [37]. Кроме того, мы предоставляем убедительные доказательства того, что HMB напрямую увеличивает высвобождение и / или накопление кальция SR в мышечных клетках (рис. 2A – 2C).Обработка HMB увеличивала вызванный KCl кальциевый ответ в полностью дифференцированных мышечных трубках C ₂ C ₁₂ , что позволяет предположить, что общее высвобождение кальция, связанное с деполяризацией, было увеличено. HMB также увеличивал вызванный кофеином ответ, предполагая, что свойства индуцированного кальцием высвобождения кальция (CICR) были усилены. Более сильный ответ на иономицин также предполагает, что HMB увеличил общее накопление Ca ^{+ 2} в SR мышечных трубок C ₂ C ₁₂ [68,78].В нашей системе визуализации Ca ⁺² изменение соотношения ΔFura-2 на 0,1 единицы приблизительно эквивалентно [Ca ⁺² ] _i 125 нМ [79]. Таким образом, HMB индуцировал увеличение высвобождения Са ⁺² из SR на 400–500 нМ больше. Другое важное наблюдение заключается в том, что HMB, по-видимому, защищает клетки от естественного снижения высвобождения кальция из-за упорядоченного эффекта последовательных химических стимуляций (рис. 2C), что позволяет предположить, что эти клетки более интактны или что соединение E-C сохраняется.Отсутствие эффекта 25 мкМ HMB на KCl и вызванное кофеином высвобождение кальция в мышечных трубках может указывать на достаточную дозу HMB для модуляции высвобождения кальция SR в мышечных клетках. Насколько нам известно, это первый отчет о положительном влиянии лечения HMB на обработку кальция и связывание EC в мышечных клетках.

В исследовании сократимости мышей позднего среднего возраста ключевым наблюдением является то, что диетические вмешательства HMB и β -аланин обычно влияют на мышечную силу и качество в большей степени в EDL-мышце, чем на камбаловидной мышце.Хорошо известно, что пагубные последствия старения проявляются в большей степени и в более раннем возрасте в начале в группах мышц, преимущественно состоящих из быстро сокращающихся миофибрилл, таких как мышца EDL, в то время как мышцы с преобладанием медленных мышечных волокон, такие как камбаловидная мышца. , имеют тенденцию сопротивляться атрофии до поздней старости [80,81]. Как абсолютная сила сокращения, так и максимальная тетаническая сила были увеличены в мышцах EDL мышей, получавших β -аланин (фиг. 4A). β -аланин также увеличивал скорость развития силы в EDL на всех частотах стимуляции (фиг. 5A).Эти данные предполагают, что добавка β -аланина улучшила биомеханические свойства быстро сокращающихся миофибрилл, обнаруживаемых с высокой частотой в мышце EDL. Мы также наблюдали увеличение абсолютной силы и качества мышц (сила, нормализованная к площади поперечного сечения мышцы) при более низкой частоте стимуляции (20 Гц) в EDL у мышей, получавших совместно с HMB и β -аланином. Кроме того, камбаловидные мышцы из той же группы демонстрировали тенденцию к повышенной устойчивости к утомляющим стимуляциям с частотой 20 Гц, чего не наблюдалось в мышце EDL.Повышенная сократимость мышц на частотах 1 Гц и 20 Гц очень важна с физиологической точки зрения, особенно с учетом того, что скелетные мышцы млекопитающих обычно функционируют в этом диапазоне [82,83]. Повышенная сократительная сила в быстро сокращающихся миофибриллах, а также повышенная устойчивость к усталости в медленно сокращающихся миофибриллах могут дать дополнительное преимущество в поддержании силы скелетных мышц и выносливости для подвижности.

Интересно, что ни мышечная масса, ни нормализованная сила в EDL не различались для β -аланина на максимальных частотах стимуляции, но так же для абсолютной силы.Возможно, что небольшое относительное увеличение влажной массы EDL-мышц, наблюдаемое при добавлении β -аланина, в сочетании с небольшим относительным увеличением нормализованной силы, взаимодействовало, создавая статистически значимое абсолютное изменение силы по сравнению с контрольными мышами. Из этих небольших изменений неясно, были ли мышечная масса или улучшенная сократимость основной движущей силой увеличения абсолютной силы. Независимо от качества мышц, абсолютная сила, вероятно, отражает более важный результат трансляции у людей, по крайней мере, в условиях, когда могут активироваться гипертрофические сигналы.Так обстоит дело со многими экспериментальными методами лечения, направленными на блокаду миостатина, и в этом случае мышечная сила увеличивается без улучшения качества мышц [84]. С точки зрения чистой силы на мышечный вес, нормализованные данные силы лучше описывают сократительную физиологию отдельных миофибрилл, чем данные абсолютной силы. Однако мы полагаем, что данные об абсолютной силе более важны для общей силы мышц и, следовательно, качества жизни стареющего человека, моделирование которого были предприняты в этих исследованиях.В конце концов, именно абсолютная сила мышц облегчает нашу повседневную деятельность. Абсолютные данные о силе также важны, потому что фиброз и накопление внутримышечного жира могут затруднить интерпретацию нормализованных форсированных данных, по крайней мере, при нормализации к сырой массе всей мышцы и даже к CSA. Альтернативный анализ предназначен для нормализации содержания миофибриллярного белка, однако мы не собирали такие лизаты в этом исследовании.

Мы обнаружили увеличение мышечной силы EDL во всех экспериментальных группах, за исключением группы HMB, в то время как камбаловидные мышцы, дополненные всеми экспериментальными диетами, не показали никакого увеличения силы.С другой стороны, добавка HMB действительно повлияла на время, необходимое для достижения максимальной сократительной силы как в EDL, так и в камбаловидной мышце (рис. 5B и 5E), что свидетельствует об усилении связи возбуждения и сокращения. Мы предполагаем, что такой результат может принести пользу в задаче с высокой степенью координации, такой как испытание производительности поворотного стержня, и это будет предметом будущих исследований. Интересно, что эффекты HMB у 19-месячных мышей с пресаркопенией позднего среднего возраста проявляются в основном в кинетических свойствах развития силы, в то время как величина производства силы не изменяется.Возможно, что преимущества добавления HMB в отношении величины мышечной силы были бы более выражены на модели мышей в возрасте 24 месяцев или старше, когда преобладает саркопения и произошла значительная атрофия мышц. Другие причины отсутствия влияния HMB на мышечную силу в этом исследовании могут относиться к умеренной дозе (эквивалентной 3 г / день для людей) и продолжительности приема добавок, имитирующей то, что может быть проверено в клиническом исследовании на людях. Следовательно, необходимы дополнительные исследования на старых мышах с дополнительными дозами и, возможно, более трансляционное фенотипирование in vivo.

Также важно отметить, что эффекты комбинации HMB и β -аланина на генерацию силы в EDL-мышце и сопротивление усталости в камбаловидной мышце при субмаксимальной частоте стимуляции 20 Гц больше, чем эффекты любого из них. только ингредиент. Неясно, как именно эти маленькие молекулы взаимодействуют, вызывая эти дополнительные эффекты в мышцах. Было показано, что β -аланин сам по себе может повышать кальциевую чувствительность сократительных белков [57,58].На генерацию силы при 20 Гц сильно влияют изменения в сцеплении E-C и особенно высвобождение кальция из саркоплазматического ретикулума [71]. Учитывая, что мы наблюдали улучшение обработки кальция при обработке культивированных миотрубок HMB, мы предполагаем, что HMB и β -аланин могут действовать, улучшая обработку кальция. Этот эффект HMB, однако, необходимо протестировать in vivo, и точно так же будет важно проверить влияние β -аланина на высвобождение кальция на нашей модели миобластов.

Таким образом, мы обнаружили, что β -аланин увеличивал стимулированные как 1 Гц, так и 80 Гц абсолютные силы EDL-мышц у мышей позднего среднего возраста. Чрезвычайно важно, что даже создавая большую силу, эти мышцы не были подвержены повреждениям, даже когда они подвергались нашему жесткому протоколу утомляющей стимуляции. Добавка β, -аланина также улучшала скорость генерации силы на всех тестируемых частотах. Когда диетический β -аланин был объединен с HMB, увеличение силы EDL происходило при физиологически релевантной частоте 20 Гц для абсолютной и нормализованной силы.В камбаловидной мышце эффекты каждого из HMB, β -аланина и их комбинации сокращали время для достижения максимальной силы. В целом, эти данные подтверждают идею о том, что диетические добавки с HMB и β -аланином могут помочь противодействовать снижению мышечной функции во время старения и сохранить мышечную функцию во время повторяющихся приступов активности. Мы также сообщаем о новом механизме действия HMB в увеличении высвобождения кальция из SR, предполагая, что HMB улучшает связывание E-C в мышечных клетках.

Благодарности

Abbott Nutrition предоставила экспериментальные диеты для этого исследования. Мы благодарим Пола Джонса и доктора Стефана Элинга, сотрудников Abbott Nutrition, за техническую помощь.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: MB NE SG. Проведены эксперименты: СП МС. Проанализированы данные: СП МС АЦ. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты для анализа: MB LB NE SG. Написал статью: СП МБ СВ СГ.

Ссылки

1. 1.McQuail JA, Frazier CJ, Bizon JL (2015) Молекулярные аспекты возрастного когнитивного снижения: роль передачи сигналов ГАМК. Тенденции Мол Мед.
2. 2. Muller-Hocker J, Seibel P, Schneiderbanger K, Kadenbach B (1993) Различные модели гибридизации in situ митохондриальной ДНК в экстраокулярных мышечных волокнах с дефицитом цитохром с-оксидазы у пожилых людей. Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол 422: 7–15. pmid: 7679851
3. 3. Shioi T, Inuzuka Y (2012) Старение как субстрат сердечной недостаточности.Журнал кардиологии 60: 423–428. pmid: 23068289
4. 4. Leung J, Cho Y, Lockey RF, Kolliputi N (2015) Роль старения в идиопатическом фиброзе легких. Легкое.
5. 5. Tudorascu I, Sfredel V, Riza AL, Danciulescu Miulescu R, Ianosi SL, Danoiu S (2014) Изменения двигательных единиц при нормальном старении: краткий обзор. Rom J Morphol Embryol 55: 1295–1301. pmid: 25611259
6. 6. Janssen I, Shepard DS, Katzmarzyk PT, Roubenoff R (2004) Затраты на здравоохранение при саркопении в Соединенных Штатах.J Am Geriatr Soc 52: 80–85. pmid: 14687319
7. 7. Розенберг И.Х. (1997) Саркопения: происхождение и клиническое значение. J Nutr 127: 990–991 годы. pmid:80
8. 8. Brotto M, Abreu EL (2012) Саркопения: фармакология сегодня и завтра. J Pharmacol Exp Ther 343: 540–546. pmid: 221
9. 9. Ланди Ф., Липероти Р., Руссо А., Джованнини С., Тосато М., Каполуонго Э. и др. (2012) Саркопения как фактор риска падений у пожилых людей: результаты исследования ilSIRENTE.Clin Nutr 31: 652–658. pmid: 22414775
10. 10. Visser M, Schaap LA (2011) Последствия саркопении. Clin Geriatr Med 27: 387–399. pmid: 21824554
11. 11. Delmonico MJ, Harris TB, Visser M, Park SW, Conroy MB, Velasquez-Mieyer P, et al. (2009) Продольное исследование мышечной силы, качества и инфильтрации жировой ткани. Am J Clin Nutr 90: 1579–1585. pmid: 19864405
12. 12. Li Y, Lee Y, Thompson WJ (2011) Изменения в нервно-мышечных соединениях стареющих мышей объясняются дегенерацией и регенерацией сегментов мышечных волокон в синапсе.J Neurosci 31: 14910–14919. pmid: 22016524
13. 13. Verdijk LB, Dirks ML, Snijders T., Prompers JJ, Beelen M, Jonkers RA и др. (2012) Уменьшение количества сателлитных клеток при повреждении спинного мозга и старении у людей. Медико-спортивные упражнения 44: 2322–2330. pmid: 22776875
14. 14. Weisleder N, Brotto M, Komazaki S, Pan Z, Zhao X, Nosek T. и др. (2006) Старение мышц связано с нарушением передачи сигналов искры Ca2 + и сегрегированным высвобождением внутриклеточного Ca2 +. J Cell Biol 174: 639–645.pmid: 16943181
15. 15. Thornton AM, Zhao X, Weisleder N, Brotto LS, Bougoin S, Nosek TM и др. (2011) Запасное поступление Ca (2+) (SOCE) способствует нормальной сократимости скелетных мышц у молодых, но не у пожилых скелетных мышц. Старение (Олбани, штат Нью-Йорк) 3: 621–634.
16. 16. Ромеро-Суарес С., Шен Дж., Бротто Л., Холл Т, Мо С., Вальдивия Х. Х. и др. (2010) Мышечно-специфическая инозитидфосфатаза (MIP / MTMR14) снижается с возрастом, и ее потеря ускоряет процесс старения скелетных мышц за счет изменения гомеостаза кальция.Старение (Олбани, штат Нью-Йорк) 2: 504–513.
17. 17. Russ DW, Wills AM, Boyd IM, Krause J (2014) Слабость, функция SR и стресс в икроножных мышцах старых самцов крыс. Опыт Геронтол 50: 40–44. pmid: 24316040
18. 18. Delbono O, O’Rourke KS, Ettinger WH (1995) Расцепление высвобождения кальция и возбуждения в отдельных волокнах скелетных мышц пожилого человека. J Membr Biol 148: 211–222. pmid: 8747553
19. 19. Tracy BL, Ivey FM, Hurlbut D, Martel GF, Lemmer JT, Siegel EL, et al.(1999) Качество мышц. II. Эффекты силовых тренировок у мужчин и женщин в возрасте от 65 до 75 лет. J. Appl Physiol (1985) 86: 195–201.
20. 20. Fiatarone MA, O’Neill EF, Ryan ND, Clements KM, Solares GR, Nelson ME, et al. (1994) Физические упражнения и пищевые добавки при физической слабости у очень пожилых людей. N Engl J Med 330: 1769–1775. pmid: 81
22. 21. Fiatarone MA, Marks EC, Ryan ND, Meredith CN, Lipsitz LA, Evans WJ (1990) Высокоинтенсивные силовые тренировки у подростков.Воздействие на скелетные мышцы. Джама 263: 3029–3034. pmid: 2342214
23. 22. Frontera WR, Meredith CN, O’Reilly KP, Evans WJ (1990) Силовые тренировки и детерминанты VO2max у пожилых мужчин. J. Appl Physiol (1985) 68: 329–333.
24. 23. Малафарина В., Уриз-Отано Ф, Иньеста Р., Гиль-Герреро Л. (2012) Саркопения у пожилых людей: диагностика, физиопатология и лечение. Maturitas 71: 109–114. pmid: 22153348
25. 24. Сакума К., Ямагути А. (2012) Новые интригующие стратегии ослабления саркопении.J Aging Res 2012: 251217. pmid: 22500226
26. 25. Папаниколау Д.А., Атер С.Н., Чжу Х., Чжоу Й., Луткевич Дж., Скотт Б.Б. и др. (2013) Рандомизированное плацебо-контролируемое клиническое исследование фазы IIA для изучения эффективности и безопасности селективного модулятора рецепторов андрогенов (SARM) MK-0773 у участниц женского пола с саркопенией. J Nutr Health Aging 17: 533–543. pmid: 23732550
27. 26. Кирн Д.Р., Кучек А., Рид К.Ф., фон Беренс А., Трависон Т.Г., Фолта С. и др. (2015) Жизнеспособность, независимость и сила в исследовании пожилых людей 2 (VIVE2): дизайн и методы.Клинические испытания Contemp 43: 164–171. pmid: 26044464
28. 27. Трабал Дж., Форга М., Лейес П., Торрес Ф., Рубио Дж., Прието Е. и др. (2015) Влияние добавок бесплатного лейцина и тренировок с отягощениями на мышечную силу и функциональный статус у пожилых людей: рандомизированное контролируемое исследование. Clin Interv Aging 10: 713–723. pmid: 25
    5
29. 28. Fitschen PJ, Wilson GJ, Wilson JM, Wilund KR (2013) Эффективность добавления бета-гидрокси-бета-метилбутирата у пожилых людей и клинических групп.Питание 29: 29–36. pmid: 23085015
30. 29. Van Koevering M, Nissen S (1992) Окисление лейцина и альфа-кетоизокапроата до бета-гидрокси-бета-метилбутирата in vivo. Am J Physiol 262: E27–31. pmid: 1733247
31. 30. Рудни H (1957) Биосинтез бета-гидрокси-бета-метилглутаровой кислоты. J Biol Chem 227: 363–377. pmid: 13449080
32. 31. Пинейро С.Х., Герлингер-Ромеро Ф., Гимараеш-Феррейра Л., де Соуза-младший А.Л., Витцель К.Ф., Нахбар Р.Т. и др.(2012) Метаболические и функциональные эффекты добавок бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMB) в скелетных мышцах. Eur J Appl Physiol 112: 2531–2537. pmid: 22075640
33. 32. Alway SE, Pereira SL, Edens NK, Hao Y, Bennett BT (2013) бета-гидрокси-бета-метилбутират (HMB) усиливает пролиферацию сателлитных клеток в быстрых мышцах старых крыс во время восстановления от атрофии неиспользования. Exp Gerontol 48: 973–984. pmid: 23832076
34. 33. Wilkinson DJ, Hossain T., Hill DS, Phillips BE, Crossland H, Williams J и др.(2013) Влияние лейцина и его метаболита бета-гидрокси-бета-метилбутират на метаболизм белков скелетных мышц человека. J. Physiol 591: 2911–2923. pmid: 23551944
35. 34. Kornasio R, Riederer I, Butler-Browne G, Mouly V, Uni Z, Halevy O (2009) Бета-гидрокси-бета-метилбутират (HMB) стимулирует пролиферацию, дифференцировку и выживание миогенных клеток через пути MAPK / ERK и PI3K / Akt . Biochim Biophys Acta 1793: 755–763. pmid: 128
36. 35. Hao Y, Jackson JR, Wang Y, Edens N, Pereira SL, Alway SE (2011) бета-гидрокси-бета-метилбутират снижает миоядерный апоптоз во время восстановления от атрофии мышечных волокон, вызванной подвешиванием задних конечностей, у старых крыс.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 301: R701–715. pmid: 21697520
37. 36. Russell ST, Tisdale MJ (2009) Механизм ослабления бета-гидрокси-бета-метилбутиратом деградации мышечного белка, вызванной липополисахаридом. Mol Cell Biochem 330: 171–179. pmid: 19404720
38. 37. Eley HL, Russell ST, Baxter JH, Mukerji P, Tisdale MJ (2007) Сигнальные пути, инициированные бета-гидрокси-бета-метилбутиратом для ослабления депрессии синтеза белка в скелетных мышцах в ответ на кахектические стимулы.Am J Physiol Endocrinol Metab 293: E923–931. pmid: 17609254
39. 38. Pimentel GD, Rosa JC, Lira FS, Zanchi NE, Ropelle ER, Oyama LM и др. (2011) добавка бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMbeta) стимулирует гипертрофию скелетных мышц у крыс посредством пути mTOR. Нутр Метаб (Лондон) 8: 11.
40. 39. Panton LB, Rathmacher JA, Baier S, Nissen S (2000) Пищевая добавка метаболита лейцина бета-гидрокси-бета-метилбутирата (hmb) во время тренировки с отягощениями.Питание 16: 734–739. pmid: 10978853
41. 40. Вукович М.Д., Стаббс Н.Б., Болкен Р.М. (2001) Состав тела у 70-летних взрослых реагирует на диетический бета-гидрокси-бета-метилбутират так же, как и у молодых людей. J Nutr 131: 2049–2052. pmid: 11435528
42. 41. Flakoll P, Sharp R, Baier S, Levenhagen D, Carr C, Nissen S (2004) Влияние добавок бета-гидрокси-бета-метилбутирата, аргинина и лизина на силу, функциональность, состав тела и метаболизм белков у пожилых женщин.Питание 20: 445–451. pmid: 15105032
43. 42. Fuller JC Jr, Baier S, Flakoll P, Nissen SL, Abumrad NN, Rathmacher JA (2011) Статус витамина D влияет на прирост силы у пожилых людей с добавлением комбинации бета-гидрокси-бета-метилбутирата, аргинина и лизина: когорта изучение. JPEN J Parenter Enteral Nutr 35: 757–762. pmid: 21807930
44. 43. Hsieh LC, Chow CJ, Chang WC, Liu TH, Chang CK (2010) Влияние бета-гидрокси-бета-метилбутирата на метаболизм белков у прикованных к постели пожилых людей, получающих зондовое питание.Азия Пак Дж. Клин Нутр 19: 200–208. pmid: 20460233
45. 44. Стаут Дж. Р., Смит-Райан А. Э., Фукуда Д. Х., Кендалл К. Л., Мун Дж. Р., Хоффман Дж. Р. и др. (2013) Эффект бета-гидрокси-бета-метилбутирата кальция (CaHMB) с тренировками с отягощениями и без них у мужчин и женщин старше 65 лет: рандомизированное двойное слепое пилотное исследование. Exp Gerontol 48: 1303–1310. pmid: 23981904
46. 45. Бертон Л., Бано Дж., Карраро С., Веронезе Н., Пиццато С., Болзетта Ф. и др. (2015) Влияние пероральных добавок бета-гидроксибета-метилбутирата (HMB) на физическую работоспособность у здоровых пожилых женщин старше 65 лет: открытое рандомизированное контролируемое исследование.PLoS One 10: e0141757. pmid: 26529601
47. 46. Deutz NE, Pereira SL, Hays NP, Oliver JS, Edens NK, Evans CM и др. (2013) Влияние бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMB) на безжировую массу тела в течение 10 дней постельного режима у пожилых людей. Clin Nutr 32: 704–712. pmid: 23514626
48. 47. Aversa Z, Bonetto A, Costelli P, Minero VG, Penna F, Baccino FM и др. (2011) бета-гидрокси-бета-метилбутират (HMB) снижает потерю мышечной массы и веса тела при экспериментальной раковой кахексии.Int J Oncol 38: 713–720. pmid: 21184031
49. 48. Smith HJ, Mukerji P, Tisdale MJ (2005) Ослабление протеолиза, индуцированного протеасомами в скелетных мышцах, с помощью {бета} -гидрокси- {бета} -метилбутирата при потере мышечной массы, вызванной раком. Cancer Res 65: 277–283. pmid: 15665304
50. 49. Слейтер Дж., Дженкинс Д., Логан П., Ли Х., Вукович М., Ратмахер Дж. А. и др. (2001) Добавка бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMB) не влияет на изменения силы или состава тела во время тренировок с отягощениями у тренированных мужчин.Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab 11: 384–396. pmid: 11599506
51. 50. Рэнсон Дж., Соседи К., Лефави Р., Хромиак Дж. (2003) Влияние бета-гидрокси-бета-метилбутирата на мышечную силу и состав тела у университетских футболистов. J Strength Cond Res 17: 34–39. pmid: 12580653
52. 51. О’Коннор Д.М., Кроу М.Дж. (2007) Влияние шести недель приема бета-гидрокси-бета-метилбутирата (HMB) и добавок HMB / креатина на силу, мощность и антропометрию высококвалифицированных спортсменов.J Strength Cond Res 21: 419–423. pmid: 17530933
53. 52. Харрис Р. К., Даннет М., Гринхафф П. Л. (1998) Содержание карнозина и таурина в отдельных волокнах мышцы латеральной широкой мышцы бедра человека. Журнал спортивных наук 16: 639–643.
54. 53. Abe H (2000) Роль соединений, связанных с гистидином, в качестве компонентов внутриклеточного буфера протонов в мышцах позвоночных. Биохимия (Моск.) 65: 757–765.
55. 54. Hill CA, Harris RC, Kim HJ, Harris BD, Sale C, Boobis LH и др.(2007) Влияние добавок бета-аланина на концентрацию карнозина в скелетных мышцах и способность к высокоинтенсивной езде на велосипеде. Аминокислоты 32: 225–233. pmid: 16868650
56. 55. дель Фаверо С., Рошель Х., Солис М.Ю., Хаяши А.П., Артиоли Г.Г., Отадуй М.С. и др. (2012) Добавки бета-аланина (карнозина) у пожилых людей (60–80 лет): влияние на содержание карнозина в мышцах и физическую работоспособность. Аминокислоты 43: 49–56. pmid: 22143432
57. 56. Маккормак В.П., Стаут Дж. Р., Эмерсон Н.С., Сканлон Т.С., Уоррен А.М., Уэллс А.Дж. и др.(2013) Пероральная пищевая добавка, обогащенная бета-аланином, улучшает физическую работоспособность у пожилых людей: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Exp Gerontol 48: 933–939. pmid: 23832078
58. 57. Dutka TL, Lamboley CR, McKenna MJ, Murphy RM, Lamb GD (2012) Влияние карнозина на сократительный аппарат Ca (2) (+) чувствительность и высвобождение Ca (2) (+) саркоплазматического ретикулума в волокнах скелетных мышц человека. J. Appl Physiol (1985) 112: 728–736.
59. 58. Дутка Т.Л., Лэмб Г.Д. (2004) Эффект карнозина на сцепление возбуждения-сокращения в скелетных мышцах крыс с механическим снятием кожи.J Muscle Res Cell Motil 25: 203–213. pmid: 15467383
60. 59. Lamont C, Miller DJ (1992) Сенсибилизирующее действие карнозина и других эндогенных имидазолов на кальций в поперечно-полосатых мышцах с химически очищенной кожей. J Physiol 454: 421–434. pmid: 1474497
61. 60. Everaert I, Stegen S, Vanheel B, Taes Y, Derave W (2013) Влияние добавок бета-аланина и карнозина на сократимость мышц у мышей. Медико-спортивные упражнения 45: 43–51. pmid: 22895378
62. 61. Mannion AF, Jakeman PM, Willan PL (1994) Влияние изокинетической тренировки разгибателей колена на выполнение упражнений высокой интенсивности и буферизацию скелетных мышц.Eur J Appl Physiol Occup Physiol 68: 356–361. pmid: 8055896
63. 62. Кендрик И.П., Харрис Р.К., Ким Х.Дж., Ким С.К., Данг В.Х., Лам Т.К. и др. (2008) Влияние 10 недель тренировок с отягощениями в сочетании с добавкой бета-аланина на силу всего тела, выработку силы, мышечную выносливость и композицию тела. Аминокислоты 34: 547–554. pmid: 18175046
64. 63. Кендрик И.П., Ким Х.Дж., Харрис Р.К., Ким С.К., Данг В.Х., Лам Т.К. и др. (2009) Влияние 4-недельного приема бета-аланина и изокинетических тренировок на концентрацию карнозина в волокнах скелетных мышц человека I и II типа.Eur J Appl Physiol 106: 131–138. pmid: 156
65. 64. Хуанг Дж., Сюй Й.Х., Мо Ц., Абреу Э., Киль Д.П., Боневальд Л.Ф. и др. (2014) METTL21C — потенциальный плейотропный ген остеопороза и саркопении, действующий посредством модуляции сигнального пути NF-kappaB. J Bone Miner Res 29: 1531–1540. pmid: 24677265
66. 65. Ян К., Лара-Кастильо Н., Бротто Л., Мо CL, Джонсон М.Л., Бротто М. и др. (2012) Факторы, секретируемые скелетными мышцами, предотвращают индуцированный глюкокортикоидами апоптоз остеоцитов за счет активации бета-катенина.Eur Cell Mater 24: 197–209; обсуждение 209–110. pmid: 22972510
67. 66. Тахара М., Иноуэ Т., Миякура Ю., Хорие Х., Ясуда Й., Фуджи Х. и др. (2013) Измерения диаметра клеток, полученные с помощью портативного счетчика клеток, можно использовать в качестве суррогатного маркера остановки G2 / M и апоптоза в клеточных линиях рака толстой кишки, подвергнутых воздействию SN-38. Biochem Biophys Res Commun 434: 753–759. pmid: 23583407
68. 67. Мо С., Ромеро-Суарес С., Боневальд Л., Джонсон М., Бротто М. (2012) Простагландин E2: от клинических применений до его потенциальной роли в перекрестных помехах между костями и мышцами и миогенной дифференцировке.Последние публикации Pat Biotechnol 6: 223–229. pmid: 230
69. 68. Brotto MA, Nagaraj RY, Brotto LS, Takeshima H, Ma JJ, Nosek TM (2004) Неправильное поддержание внутриклеточного гомеостаза Ca2 + связано с повышенной мышечной утомляемостью у мышей без MG29. Cell Res 14: 373–378. pmid: 15538969
70. 69. Park KH, Brotto L, Lehoang O, Brotto M, Ma J, Zhao X (2012) Ex vivo оценка сократимости, утомляемости и альтернатив в изолированных скелетных мышцах. J Vis Exp: e4198.pmid: 23149471
71. 70. Brotto MA, Andreatta-van Leyen S, Nosek CM, Brotto LS, Nosek TM (2000) Гипоксия и вызванная усталостью модификация функции и белков в неповрежденной и содранной мышце диафрагмы мыши. Pflugers Arch 440: 727–734. pmid: 11007314
72. 71. Brotto MA, Nosek TM, Kolbeck RC (2002) Влияние старения на утомляемость изолированных скелетных мышц мышей от зрелых и старых мышей. Exp Physiol 87: 77–82. pmid: 11805861
73. 72. Аллен Д.Г., Вестерблад Х (1995) Влияние кофеина на внутриклеточный кальций, силу и скорость расслабления скелетных мышц мыши.J. Physiol 487 (Pt 2): 331–342. pmid: 8558467
74. 73. Wendt IR, Stephenson DG (1983) Влияние кофеина на выработку Са-активируемой силы в очищенных от кожи сердечных и скелетных мышечных волокнах крысы. Арка Пфлюгерса 398: 210–216. pmid: 6634380
75. 74. Brotto M, Brotto L, Jin JP, Nosek TM, Romani A (2010) Временные адаптивные изменения сократительной способности и утомляемости мышц диафрагмы у стрептозотоцин-диабетических крыс. J Biomed Biotechnol 2010:
76. 3. pmid: 20467472
77. 75.de Paula Brotto M, van Leyen SA, Brotto LS, Jin JP, Nosek CM, Nosek TM (2001) Гипоксия / вызванная усталостью деградация тропонина I и тропонина C: новый взгляд на физиологическую мышечную усталость. Арка Пфлюгерса 442: 738–744. pmid: 11512030
78. 76. Verdijk LB, Koopman R, Schaart G, Meijer K, Savelberg HH, van Loon LJ (2007) Содержание сателлитных клеток особенно снижено в волокнах скелетных мышц типа II у пожилых людей. Am J Physiol Endocrinol Metab 292: E151–157. pmid: 161
79. 77.Shefer G, Van de Mark DP, Richardson JB, Yablonka-Reuveni Z (2006) Размер пула сателлитных клеток имеет значение: определение миогенной силы стареющих скелетных мышц. Дев Биол 294: 50–66. pmid: 16554047
80. 78. Шен Дж., Ю. В. М., Бротто М., Шерман Дж. А., Го С., Стоддард С. и др. (2009) Дефицит фосфатазы MIP / MTMR14 вызывает мышечное расстройство, нарушая гомеостаз Ca (2+). Nat Cell Biol 11: 769–776. pmid: 19465920
81. 79. Grynkiewicz G, Poenie M, Tsien RY (1985) Новое поколение индикаторов Ca2 + со значительно улучшенными флуоресцентными свойствами.J Biol Chem 260: 3440–3450. pmid: 3838314
82. 80. Deschenes MR, Gaertner JR, O’Reilly S (2013) Влияние саркопении на мышцы с различными паттернами рекрутирования и профилями миофибрилл. Curr Aging Sci 6: 266–272. pmid: 24180230
83. 81. Purves-Smith FM, Solbak NM, Rowan SL, Hepple RT (2012) Тяжелая атрофия медленных миофибрилл в стареющих мышцах скрыта совместной экспрессией тяжелой цепи миозина. Опыт Геронтол 47: 913–918. pmid: 22884852
84. 82. Эдвардс Р.Х., Хилл Д.К., Джонс Д.А., Мертон П.А. (1977) Длительная усталость скелетных мышц человека после тренировки.J Physiol 272: 769–778. pmid: 5
85. 83. Эдвардс Р. Х., Янг А., Хоскинг Г. П., Джонс Д. А. (1977) Функция скелетных мышц человека: описание тестов и нормальные значения. Clin Sci Mol Med 52: 283–290. pmid: 844260
86. 84. Латрес Э., Пангилинан Дж., Милошцио Л., Бауэрлейн Р., На Э., Потоцкий Т. Б. и др. (2015) Блокада миостатина полностью человеческими моноклональными антителами вызывает гипертрофию мышц и обращает атрофию мышц у молодых и старых мышей. Скелетная мышца 5: 34. pmid: 26457176

История | Марширующий оркестр «Соколиный глаз»

В 1954 году у футбольной команды было всего четыре победных сезона за предыдущие двадцать лет, но главный тренер Форест Евашевски был уверен, что Айова была на грани прорыва.Чтобы соответствовать этой уверенности, ему нужна была группа, достойная выступления в самой грандиозной из всех игр в чашу — Rose Bowl. Эту задачу поручили Фредерику Эббсу. Творческое воображение Эббса внесло новый динамичный и жизнерадостный стиль шоу-бэнда в Hawkeye Marching Band.

Фрэнк Пирсол, который был нанят в 1967 году, курировал передачу управления оркестром «Ястребиный глаз» от ответственности директора оркестров до заместителя директора. Томас Л. Дэвис, который был ассистентом Эббса и Пирсола, занял пост в 1968 году и использовал свой композиторский талант для создания свежих музыкальных аранжировок для ИСБ.Он также курировал возвращение женщин в оркестр впервые за почти тридцать лет.

Лидерство Morgan Jones показало наибольший рост не только по количеству участников группы, но и по качеству. За его восемнадцать лет в качестве директора ИСБ были внесены серьезные изменения в стиль выступления группы в перерыве между перерывами, а также в униформу. Группа выступала во многих играх с чашами после того, как университет нанял главного футбольного тренера Хайдена Фрая, в том числе еще трех Rose Bowls.Это сделало Джонса единственным человеком, связанным с группой, который участвовал во всех пяти играх Iowa Rose Bowls. Его срок пребывания в должности увенчался присуждением престижной награды Sudler Trophy в 1990 году.

В 1990-е годы ИСБ вступил в переходный период. Дэвид Вудли, выпускник программы, был нанят временным директором в 1991 году. Однако его срок был недолгим, когда Дэвид Хеннинг был принят на должность директора в 1993 году. Хотя Хеннинг имел прекрасное видение программы, его срок пребывания в должности был также недолгим. , и он покинул университет в 1996 году.Джонс был возвращен в качестве временного директора на два года, чтобы помочь восстановить стабильность программы.