Тюнинг 2104: Тюнинг на ВАЗ 2104 (четверка) купить с доставкой по РФ

Содержание

ВАЗ 2104, тюнинг — Лада мастер

Каждая из заднеприводных моделей ВАЗ по-своему уникальна и это порой заметно только узкому кругу поклонников тольяттинской классики. Никакой англичанин не поймёт, почему 2106 и 2103 — это разные модели и чем пятёрка отличается от семёрки. Но универсалов, по-настоящему вместительных и функциональных, было всего два, 2102 и 2104. Они верой и правдой продолжают служить своим хозяевам, главное вовремя проявлять заботу о старичках.

Содержание:

  1. Свято место — пусто
  2. Модификации и заводской тюнинг 2104
  3. Тюнинг мотора ВАЗ 2104
  4. Внешний тюнинг и тюнинг салона

Свято место — пусто

На рынке автомобилей постсоветского пространства после ухода со сцены ВАЗ 2102 образовался вакуум. Универсалов просто не было, если не считать Москвич 434 и Волгу 24-02, которые встречались довольно редко. Четвёрка появилась, как модификация 2105, полностью на её базе, с её двигателями, но с усиленной задней подвеской и пониженным передаточным числом в главной паре редуктора.

Простая по конструкции, достаточно надёжная машина, недорогая в эксплуатации до сих пор остаётся самым дешёвым универсалом, который только можно купить. Причём, купить четвёрку можно в ещё очень сносном состоянии, поскольку последний экземпляр вышел из ворот завода в Ижевске в 2012 году. Хотя, нет. Если очень захотеть, можно привезти четвёрку из Египта, где их собирают, кажется, по сей день. Только с растаможкой и всеми налогами она будет стоить не меньше приличного универсала от Вольво. Поэтому единственный вариант дёшево получить хорошую ВАЗ 2104 тюнинг и доводка автомобиля с приличным пробегом.

Модификации и заводской тюнинг 2104

ВАЗ 2104 довольно редкая по количеству комплектаций ВАЗовская модель. В разное время можно было встретить четвёрку с такими индексами, коробками, салонами и двигателями:

  • обычная 2104, двигатель 2105, карбюратор, четырехступенчатая КПП, база;

  • 21043, более мощная версия автомобиля с мотором от тройки, среди них встречались варианты с салоном и электрооборудованием от 2107, также впервые на ней могла быть установлена 5-ступенчатая КПП;

  • 21044 — автомобиль с впрысковым семерочным 1700-кубовым мотором и 5-ступенчатой КПП;

  • 21045 — редкая дизельная модификация с мотором ВАЗ 341, её выпускали только шесть лет, до 2006 года;

  • 21041i — 1,6-литровый мотор от шестёрки с инжектором, салон и электрооборудование от 2107, передние кресла от Иж 2126.

В остальном, кроме задней части салона, спинки сиденья и багажного отсека 2104 ничем не отличалась от пятёрки.

Тюнинг мотора ВАЗ 2104

В зависимости от модели двигателя, который установлен на четвёрку, машина могла иметь разную мощность, но даже самый мощный семерочный мотор не выдаст больше 82 сил. В принципе, для хозяйства этого достаточно, но мощность впрыскового мотора можно увеличить путём перепрошивки ЭБУ, а карбюраторного — точной калибровкой и регулировкой карбюратора. Прирост динамики и мощности не поразит цифрами, но для нормальной эксплуатации дополнительных несколько сил не помешает никогда.

Даже если поработать со стоковым мотором и провести его доводку, он не вызовет никаких претензий и отдаст все, что в него заложено конструкцией, большего ждать от него на стоит. Достаточно отбалансировать маховик и сцепление в сборе с коленвалом, подогнать по весу поршни и шатуны, чтобы разница составляла не более 1-1,5 г. Двигатель станет работать равномернее, лучше запускаться и стабильнее работать на холостых и высоких оборотах.

Внешний тюнинг и тюнинг салона

Вначале о полезных улучшениях, которые затрагивают также и внешность четвёрки. Всем известна проблема с постоянным забрызгиванием задней двери. При движении на высокой скорости в зоне двери багажника создаётся разряжение, куда и затягиваются частички пыли вместе с водяной взвесью. Эту проблему можно решить двумя способами:

  1. Установка дефлектора на заднюю кромку крыши. Это поможет получить дополнительный обдув чистым воздухом зоны разряжения, так можно избежать загрязнения задней двери если не полностью, то заднее стекло будет чистым точно.

  2. Более незаметный способ, но тоже очень действенный. Нижняя часть заднего бампера отгибается внутрь, а к ней крепится пластина из пластика размером 1100х150 мм вплотную к кромке кузова.

Тюнинг салона — это творческий полет хозяина автомобиля. Здесь хороши те средства, которые делают универсал функциональнее и комфортнее.

Обшивка сидений кожей или дорогими материалами едва ли станет лучшим решением для утилитарного универсала, хотя если ВАЗ 2104 это единственный автомобиль в семье, то уместным будет установка качественного звука, передней панели от иномарок или консоли от модели 2107. Любите свой автомобиль и пускай он служит долго, надёжно, в зной и в мороз.

Удачной всем работы и ровных дорог!

Чип-тюнинг ВАЗ 2104 | Чипмастер

Тип ЭБУ

Название Мощность Крутящий момент Стоимость
Тип ЭБУ 68/75 112/127 3000
VS 5.1 68/75 112/127 3500
Bosch M1.5.4 68/75 112/127 4500
Bosch M7.9.7 68/75 112/127 3500
Bosch M7.9.7+ 68/75 112/127
3500
Январь 5.1 74/82 120/136 3000
VS 5.1 74/82 120/136 3500
Bosch M1.5.4 74/82 120/136 4500
Январь 7.2 81/90 128/145 3000
Январь 7.2 + 81/90 128/145 4000
М73 81/90 128/145 4000
М74 81/90 128/145 5000

В настоящее время можно встретить немало почитателей продукции отечественного автопрома. Чаще всего владельцы Лада 2104 повышают характеристики своего автомобиля для его лучшей и более экономичной производительности. Предпочтение отдается чип-тюнингу 2104 – усовершенствованию автомобиля без проникновения в конструкцию и без ее изменений.

Чип тюнинг ВАЗ 2104

Что же представляет из себя такой сервис? Прошивка двигателя Лады 2014 включает в себя комплекс процедур по улучшению работы двигателя и снижению расхода топлива. Также предусмотрена прошивка ЭБУ. Оптимизация блока управления поможет наладить программное отключение датчиков. Наладится работа лямба-зонтов и клапана ЕГР. Исчезнут ошибки ЭБУ по низкой активности катализатора.

Преимущества чип-тюнинга ВАЗ 2104 в Чипмастер

Наш автосервис один из самых крупных и широкопрофильных в Москве. Мы обслуживаем автотехнику любого типа. Современное оборудование и высокая квалификация мастеров обеспечивает гарантированный результат, которым довольны тысячи наших клиентов. Обратившись к нам, вы приятно удивитесь увеличением мощности двигателя минимум на 10%.

Передний бампер «Тюнинг-1» для ВАЗ 2104, 2105, 2107 не окрашенный

Название:

Артикул:

Текст:

Выберите категорию:
Все RSPROдажа Двигатель » Двигатели ВАЗ в сборе » Блоки цилиндров » Головки блока цилиндров (ГБЦ) » Коленвалы » Распредвалы 16V » Распредвалы 8V » Распредвалы Классика » Шкивы / звезды / шестерни » Шатуны облегченные » Поршни » Кольца поршневые » Клапана облегченные » Тарелки клапанов » Направляющие клапанов » Толкатели клапанов жесткие » Ремни ГРМ / ролики / натяжители цепи » Маховики облегченные » Прокладки » Буст-контроллеры » Шатуны стандартные и комплектующие » Подогрев тосола » Комплекты для ТО Впускная система » Спортивные ресиверы » Дроссельные заслонки спорт » Карбюраторы спорт » Воздушные фильтры инжекторные » Фильтры нулевого сопротивления карбюраторные » Кронштейн нулевого фильтра » Регулятор давления топлива » 4-х дроссельный впуск Выхлопная система » Комплекты выхлопной системы »» Лада Веста »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Лада Нива 4×4 »» ВАЗ 2108-2109-21099 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2101-2105-2107 (Классика) » Пауки (выпускной коллектор) » Вставки для замены катализатора » Резонаторы (приемные трубы) » Глушители »» Лада Веста »» Лада Икс Рей »» Лада Гранта, Гранта FL »» Лада Калина, Калина 2 »» Лада Ларгус »» Лада Приора »» Лада 4х4 (Нива) »» Шевроле/Лада Нива »» ВАЗ 2108, 2109, 21099 »» ВАЗ 2110, 2111, 2112 »» ВАЗ 2113, 2114, 2115 »» ВАЗ 2101-2107 (Классика) »» Иномарки » Комплектующие для установки » Насадки на глушитель » Виброкомпенсаторы (Гофра) Турбо раздел » Приводные компрессоры АвтоТурбоСервис » Интеркулеры » Турбины » Турбоколлектор КПП / Коробка передач » Главные пары » Спортивные ряды » Блокировки КПП » Усиленные полуоси / валы / привода » Сцепление » Сцепление металлокерамика » Карданчик кулисы КПП » Короткоходные кулисы » Раздаточная коробка и комплектующие Подвеска » Стойки и амортизаторы DEMFI » Стойки и амортизаторы SS20 » Стойки и амортизаторы АСТОН » Опоры стоек / усилители опор » Пружины » Проставки развала / шпильки колес » Шумоизоляторы и отбойники »» ВАЗ 2108-2115 »» ВАЗ 2110-2112 »» Лада Калина, Лада Гранта » Полиуретановые сайлентблоки и втулки » Комплектующие » Подшипники » Поворотные кулаки и комплектующие » Ступицы и комплектующие » Задний мост Рулевое управление » Электроусилители руля (ЭУР) » Комплектующие ЭУР » Гидроусилители руля » Рулевой промежуточный вал » Рулевая рейка » Комплектующие рулевой рейки Тормозная система » Гидравлический ручной тормоз » Вакуумные усилители тормозов / ГТЦ » Задние дисковые тормоза » Тормозные диски » Тормозные колодки » Комплектующие тормозной системы » Задние тормозные барабаны Растяжки / защита / упоры / усиление жесткости кузова » Растяжки » Опоры двигателя » Подрамники » Защита картера » Рычаги передней подвески » Рычаги задней подвески » Стабилизатор устойчивости » Поперечины » Усилители кузова » Упоры капота и багажника » Крабы / гитары » Реактивные штанги » Комплектующие Внешний вид/обвесы » Бампера передние »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Датсун »» Лада Нива 4×4 »» ВАЗ 2108-2109-21099 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2101-2105-2107 »» Рено Дастер » Бампера задние »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Датсун »» Лада Нива 4×4 »» ВАЗ 2108-2109-21099 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Решетки радиатора »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Лада Нива 4×4 »» ВАЗ 2108-21099 »» ВАЗ 2113-2114 »» ВАЗ 2110-2112 »» Датсун »» ВАЗ 2101-2105-2107 »» Лада Ларгус »» Рено Дастер »» KIA »» Лада Нива (ВАЗ 2123), Шевроле Нива (ВАЗ 2123) » Решетки бампера нижние »» Лада Веста »» Лада Приора »» Лада Калина »» Лада Ларгус »» Датсун » Кузовные детали »» Лада Приора »» Лада Гранта »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2108-2109-21099 »» Лада Нива 4х4 »» Лада Ларгус »» Шевроле Нива »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Реснички на фары »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Ларгус »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2108-2109-21099 » Накладки на фонари » Боковые зеркала и стекла »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Шевроле Нива »» Лада Нива 4×4 »» ВАЗ 2108-2115 »» ВАЗ 2110-2112 »» Лада Ларгус »» Датсун »» ВАЗ 2101-2105-2107 (Классика) » Накладки на зеркала »» Лада Веста »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина 1/2 »» Лада Нива 4×4 »» Датсун »» ВАЗ 2108-2109; 2113-2115 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» Шевроле Нива »» Ларгус, Дастер » Евроручки » Накладки на ручки » Сабли (планки номера) » Молдинги » Накладки на пороги внешние » Накладки кузова / бампера / Cross » Спойлера » Рамки ПТФ » Жабо » Плавники на крышу » Фаркопы » Защита порогов »» Лада Нива 4×4 »» Шевроле Нива »» Лада Иксрей » Навесная защита » Рейлинги и комплектующие » Дефлекторы » Автобоксы / автопалатки » Рамки на номера » Знаки и наклейки » Брызговики и подкрылки » Автостекла » Прочее для внешнего тюнинга » Материалы для установки » Шноркели Салон » Европанели и комплектующие » Обивки дверей »» Лада Приора »» Лада Калина »» Лада Гранта »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2108-2109-2115 »» Лада Нива 4х4 »» Шевроле Нива »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Комплектующие обивок дверей » Обивка багажника и капота » Бесшумные замки ВАЗ » Центральная консоль » Коврики в салон »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Нива 4х4 »» Datsun on-Do, mi-Do »» Шевроле Нива | Нива Тревел »» Лада Ларгус »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2108-2114-2115 »» ВАЗ 2101-2105-2107 »» УАЗ »» Renault »» Nissan »» Chevrolet »» Mitsubishi »» Mercedes »» Opel »» Peugeot »» Porsche »» Audi »» BMW »» Citroёn »» Daewoo »» Ford »» Hyundai »» Kia »» Volkswagen » Ковролин пола / багажника » Рули »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Нива 4х4 »» Datsun on-Do, mi-Do »» Шевроле Нива »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2108-2114-2115 »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Муляжи подушек / подушки безопасности » Кожух руля » Подрулевые переключатели » Ручки КПП и ручника » Накладки на педали » Сидения, чехлы и комплектующие » Обогрев сидений » Подлокотники / подголовники » Выкидные и заводские ключи / чипы » Блоки управления / Кнопки » Ремни безопасности » Накладки на пороги » Уплотнители дверей | багажника | стекол »» Лада Веста »» Лада Икс Рей »» Лада Гранта, Гранта FL »» Лада Калина, Калина 2 »» Лада Приора »» Лада 4х4 (Нива) »» Шевроле/Лада Нива »» ВАЗ 2108, 2109, 21099 »» ВАЗ 2110, 2111, 2112 »» ВАЗ 2113, 2114, 2115 »» ВАЗ 2101-2107 (Классика) » Обивка потолка »» Лада Гранта, Гранта FL »» Лада Калина, Калина 2 »» Лада Приора »» Лада 4х4 (Нива) »» Шевроле/Лада Нива »» ВАЗ 2108, 2109, 21099 »» ВАЗ 2113, 2114, 2115 »» ВАЗ 2110, 2111, 2112 »» ВАЗ 2101-2107 (Классика) »» Лада ОКА » Плафоны | подсветка салона » Солнцезащитные козырьки » Облицовки | обшивки | прочее для салона »» Лада Веста »» Лада Иксрей »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Нива 4х4 »» Datsun on-Do, mi-Do »» Шевроле Нива »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2108-2114-2115 »» ВАЗ 2101-2105-2107 »» Лада Ларгус Полки, подиумы, короба » Лада Веста » Лада Приора » Лада Калина » Лада Гранта » Лада Ларгус » Шевроле Нива » ВАЗ 2110-2112 » ВАЗ 2113-2115 » ВАЗ 2108-21099 » ВАЗ 2105-2107, Нива 4х4 » Ford » Chevrolet » KIA » Hyundai » Разное (Mazda, Opel, Skoda, Renault, Daewoo) Автомобильная оптика » Стандартная оптика »» Лада Веста »» Лада Икс Рей »» Лада Гранта, Гранта FL »» Лада Калина, Калина 2 »» Датсун »» Лада Ларгус »» Лада Приора »» Лада 4х4 (Нива) »» Шевроле/Лада Нива »» ВАЗ 2108, 2109, 21099 »» ВАЗ 2110, 2111, 2112 »» ВАЗ 2113, 2114, 2115 »» ВАЗ 2101-2107 (Классика) » Фары передние тюнинг »» Лада Веста »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Нива 4х4 »»» Передние фары »»» Подфарники »» Шевроле Нива »» ВАЗ 2108-2109-21099 »» ВАЗ 2113-2114-2115 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Задние фонари тюнинг »» Лада Веста »» Лада Приора »» Лада Гранта »» Лада Калина »» Лада Нива 4х4 »» Лада Ларгус »» ВАЗ 2108-2109-2115 »» ВАЗ 2110-2111-2112 »» ВАЗ 2101-2105-2107 » Противотуманные фары (ПТФ) »» Лада Веста »» Лада Икс Рей »» Лада Гранта, Гранта FL »» Лада Калина, Калина 2 »» Лада Ларгус »» Лада Приора »» Лада 4х4 (Нива) »» Шевроле/Лада Нива »» ВАЗ 2110, 2111, 2112 »» ВАЗ 2113, 2114, 2115 »» Иномарки »»» Renault (Рено) »»» Ford (Форд) »»» Volkswagen (Фольксваген) » Поворотники (повторители поворота) » Дневные ходовые огни » Ангельские глазки » Ксенон » Галогеновые лампы » Электрокорректоры фар » Комплектующие для установки » Светодиодные балки » Светодиодные лампы Электроника » Бортовые компьютеры » Электронные комбинации приборов » Стробоскопы » Блоки управления двигателем (ЭБУ) » Блоки управления двигателем для Е-газа » Радар-детекторы » Корректоры Е-газа ВАЗ, ГАЗ, УАЗ » Корректоры Е-газа Иномарки » Камеры заднего вида » Парктроники » Блоки управления подушкой безопасности » Реле, автосвет, прочее » Музыка Сигнализации и противоугонные системы » Автосигнализации » Блокираторы руля » Чехлы для брелков Тонировка / шторки / пленка для кузова » Съемная тонировка » Тонировочная пленка » Солнцезащитные шторки » Пленки для кузова » Тонировочный лак » Водоотталкивающая пленка Стандартные запчасти ВАЗ » Топливная система / бензобаки »» Баки топливные »» Бензонасосы и комплектующие »» Крышки и клапаны » Крышки двигателя » Уплотнители / утеплители / шумоизоляция » Стеклоподъемники » Шкивы коленвала » Толкатели гидравлические » Радиатор / система кондиционирования » Стартеры » Модули и катушки зажигания » Бачки омывателя » Высоковольтные провода » Водяные помпы » Датчики скорости » Жгуты проводов »» Жгуты проводов для ВАЗ 2101-2107 »» Жгуты проводов для ВАЗ 2108-21099 »» Жгуты проводов для ВАЗ 2113-2114 »» Жгуты проводов для ВАЗ 2110-2112 »» Жгуты проводов для Lada Kalina 1/2 »» Жгуты проводов для Lada Priora »» Жгуты проводов для Lada 4х4 »» Жгуты проводов для Сhevrolet Niva »» Жгуты проводов для Lada Granta »» Жгуты проводов для Lada Largus »» Жгуты проводов для Lada Xray »» Жгуты проводов для Lada Vesta »» Жгуты проводов для UAZ Patriot » Генераторы и комплектующие » Фильтры » Шаровые опоры » Резисторы электронного вентилятора отопителя » Свечи зажигания » Электродвигатели отопителей » Буксировочные крюки » Замки зажигания » Щетки стеклоочистителя » Вентиляторы и комплектующие » Система смазки. Комплектующие » Маховики и комплектующие » Термостаты и комплектующие Аксессуары » Звуковые сигналы » USB зарядники » Компрессоры / Насосы » Комплектующие колес » Автоодеяла

Производитель:
ВсеMotorRing

Новинка:
Вседанет

Спецпредложение:
Вседанет

Результатов на странице: 5203550658095

Найти

тюнинг сделать самому своими руками

Автомобиль 2104, тюнинг которого реально выполнить собственными силами, пользуется большим спросом на отечественном рынке. При надлежащем обслуживании и правильной эксплуатации машина надежно и долго проработает и в штатном оснащении. Однако многие владельцы желают оформить эксклюзивный интерьер транспортного средства, а также улучшить ходовые и тяговые характеристики. Рассмотрим возможности усовершенствования этой марки.

Доработка кузова

Модель 2104, тюнинг которой зачастую направлен на модернизацию кузова, в этом ключе может быть доработана в трех вариантах:

  1. Легкая модернизация – производится замена радиаторных решеток, монтаж минимального обвеса, легкосплавных дисков и тонировка стекол.
  2. Средний тюнинг подразумевает установку новой оптики, ручек и замков, а также оснащение полным обвесом и нанесение аэрографии.
  3. Глубокая доработка заключается в переделки конструкции кузова, с изменением клиренса, дверей, занижении крыши.

Фантазия, творческий подход и немного умения позволит придать заурядной модели 2104, тюнинг которой выполнить не сложно, вид машины представительского класса. Особое внимание стоит уделить покраске и полировке кузова. Монтаж раритетных колпаков и хромированных вставок гармонично дополнит общую картину усовершенствования экстерьера.

Занизить салон на несколько сантиметров можно посредством обрезания стоек с одновременной доработкой бампера и задних световых элементов. При умелом подходе, такое решение позволит кардинально изменить внешность авто. Однако следует помнить, что к низкой крыше придется привыкать при посадке.

Серия 2104: тюнинг салона

Если подразумевается капитальная переделка интерьера, то следует заменить рулевое колесо, рукоятку переключения скоростей. При выборе руля, нужно учитывать его совместимость с представленным автомобилем. В противном случае может получиться обратный эффект, ухудшающий определенные технические параметры техники.

Чаще всего в салоне народные умельцы меняют сидения и обшивку. Благо, найти аналоги из качественных современных материалов вполне реально. Не обязательно в качестве обивки использовать кожу, поскольку это недешево. Вполне подойдут заменители или велюр. Любители спортивного стиля могут установить соответствующие сидения с фиксированной посадкой и плотно подогнанными ремнями.

Также в салоне тюнинг своими руками (2104) реально провести в части световых элементов. Улучшить интерьер поможет замена подсветки панели приборов на светодиоды, а также монтаж аналогичных элементов на дверях, осветительных лампах. В классический вариант усовершенствования внутренней начинки входит замена ковриков, дверных панелей и потолочной отделки.

Улучшение двигателя

Не стоит забывать о модернизации силового агрегата вашей «четверки». Тюнинг 2104, фото которого представлено ниже, в этом плане можно произвести двумя способами. В простом варианте используют расточку цилиндров, что позволяет увеличить рабочий объем мотора. При этом также возрастает максимальный крутящий момент.

Второй способ связан с увеличением хода элементов поршневой группы. Потребуется правильно подобрать новые шатуны и заменить коленчатый вал. Такую работу лучше доверить профессионалам. Модернизированный автомобиль будет сложнее удержать на дороге после усиления мощности двигателя. Для предотвращения таких неприятных моментов следует доработать подвеску. Оптимальным вариантом станет монтаж спортивной системы, которая подвержена регулировке. Более жесткая подвеска, а также увеличенный клиренс дадут возможность лучше контролировать машину на дороге с одновременным увеличением показателя максимальной скорости.

Тормозная и выхлопная система

Питающий и отводящий узел на «четверке» можно усовершенствовать путем замены глушителя на прямоточный вариант и монтажа нулевого воздушного фильтра, а также спортивного выпускного коллектора типа «паук».

Новая система тормозов позволит усилить безопасность передвижения. Для этого достаточно заменить барабанные элементы эффективным и более чувствительным блоком с вентилируемыми дисками размером тринадцать дюймов.

Что еще можно изменить?

Как вариант ВАЗ-2104, тюнинг которого многие выполняют самостоятельно, можно укоротить.

Усекновение кузова превращает и без того не особенно громоздкую машину в маневренную малолитражку, которой все узкие переулки и пробки не страшны. В качестве эксперимента некоторые умельцы переносят запаску на крышку багажника. Сама процедура укорочения авто состоит из нескольких основных операций:

  1. Вырезка части пассажирского отсека.
  2. Уменьшение длины карданного вала.
  3. Перекладка электрической проводки, тормозной системы.
  4. Покраска и полировка получившегося шедевра.

В практическом плане уменьшение длины транспортного средства рассматриваемой марки позволит немного сэкономить на расходе топлива, а внешняя трансформация заставит удивиться и восхититься многих участников дорожного потока.

Кроме того, можно обновить оптику «четверки», заменив ее ксеноновыми линзами со светодиодным «ангельским» подводом. Немного «поколдовав» над формой багажника, реально смонтировать укороченные задние стоп-сигналы, по типу американских авто. Снизить раскачку кузова и повысить мягкость хода позволит пневматическая подушка, устанавливаемая во внутренней части пружины. Функционируют подобные элементы, как и при стандартной оснастке авто.

В завершение

Отечественный автомобиль ВАЗ-2104, тюнинг которого по силам большинству автомобилистов, можно преобразить до неузнаваемости. Заниженный салон, новая обивка, обвес, оригинальные световые элементы и аэрография – это всего лишь часть способов, как усовершенствовать родное транспортное средство.

Не лишним будет усилить мотор, путем замены его на более мощный вариант или посредством расточки цилиндров, а также усилить узел подвески. Как вариант, можно установить пружины с «Волги» или «Нивы», что позволит увереннее преодолевать отечественные дороги, особенно участки с выбоинами и ямами. Используя фантазию и правильный подход, вы сделаете из своей «четверки» настоящий и уникальный шедевр.

Тюнинг ваз 2104 своими руками

ВАЗ 2104 является популярной отечественной машиной. Она является высоко функциональной. Автомобиль при хорошей эксплуатации будет работать долго и хорошо. Однако , каждому автовладельцу хочется, чтобы характеристики его автомобиля улучшались. Поэтому нужно провести тюнинг ваз 2104 своими руками.

Тюнинг ваз 2104 своими руками проводится для того, чтобы улучшить технические и визуальные характеристики атвомобиля. Устаревшие детали заменяются на новые с более мощными параметрами. При тюнинг ваз 2104 своими руками следует сразу решить в каком объёме будет производиться тюнинг. Ведь можно произвести тюнинг двигателя или салона, а возможно и то, и другое.

Что будем тюнинговать

При тюнинге ваз 2104 своими руками следует улучшить систему зажигания, в данной модели она имеет некоторые недостатки, такие как невысокая долговечность опорных подшипников, износ кулачка прерывателя и контактов. Во время тюнинга ваз 2104 своими руками можно улучшить увеличение напряжения во вторичной цепи после чего повысится мощность искры. Также вырастает динамика автомобиля.

При тюнинге ваз 2104 своими руками можно установить бесконтактную систему зажигания. Для этого потребуются: коммутатор (3620.3734), датчик-распределитель зажигания вместе с микроэлектронным датчиком импульсов, катушка зажигания (27.3705) вместе с разомкнутым магнитопроводом, высоковольтные провода для работы во вторичной сети с высоким напряжением и комплект свечей (А17ДВР).

Для внешнего тюнинга ваз 2104 своими руками можно приобрести задние фонари и блок-фары, фильтры нулевого сопротивления, дополнительные приборы.

При тюнинге ваз 2104 своими руками желательно установить более интересную подсветку. В последнее время достаточно популярна светодиодная подсветка. Светодиодами заменяются стандартные лампы. Также можно установить неоновую подсветку. Эффектно будет выглядеть дополнительная подсветка – например, при открытии бардачка. Также можно подсветить днище автомобиля, колесные арки.

При тюнинге ваз 2104 своими руками можно полностью изменить салон. Желательно выбирать прочные материалы с контрастными яркими цветами. Хорошим вариантом будет кожа. Но так как этот материал достаточно дорогой, то можно применить твид или велюр. Кожзаменитель прослужит не так долго, как кожа, но выглядит тоже неплохо. К тому же материалы представлены в большой цветовой палитре – поэтому выбрать нужный не составит труда.

Доработка кузова, тюнинг кузова Ваз 2107, Ваз 2105, Ваз 2104, Лада Классика

ВАЗ

/

2104, 2105, 2107

/

тюнинг

/

кузова

Доработка кузова, тюнинг кузова Ваз 2107, Ваз 2105, Ваз 2104, Лада Классика

. Тюнинг кузова ваз 2105 своими руками, советы по доработке кузова ваз 2104, внешний тюнинг ваз 2104, ваз 2105, ваз 2107. Тюнинг — это изменение и доработка заводских настроек автомобиля. Тюнинг ваз своими руками занятие трудоемкое, поэтому мы решили поделиться некоторыми инструкциями по доработке ваз 2104. Тюнинг может быть дешевым и дорогим, поверхностным и глубоким. Доработка ваз 2107 рассмотрена по разделам: тюнинг салона, тюнинг подвески и рулевого управления, тюнинг тормозной системы и кузова, а также тюнинг двигателя и тюнинг коробки передач. В первую очередь при тюнинге ваз 2105 следует обратить внимание на систему зажигания. Классика популярный автомобиль, который предоставляет своему хозяину широкий простор тюнинга и доработок.

При опускании капота этот самый упор необходимо вывести из фиксатора и только после этого закрывать что вызывает некоторые неудобства. В шестой модели фиксатор капота устроен так просто и удобно что к этому быстро привыкаешь, открытие и закрытие капота происходит не прибегая к лишним телодвижениям, а все манипуляции с упором 7 модели откровенно говоря раздражают. Именно это и подвигло меня на установку

Я думаю что все владельцы классики и не только сталкивались с таким понятием как «мертвая зона» — то есть та часть пространства вокруг вашего авто которую вы не видите ни в зеркало ни боковым зрением. А ведь именно в этой гиблой зоне в данный момент справа или слева вас может обгонять или опережать другое транспортное средство, не заметив которое и начав перестраиваться вы можете создать аварийную ситуацию.

Вот общее фото того, как выглядят эти фонари в упаковке: В комплекте лампочки не прилагаются, поэтому были приобретены h4 лампочки Philips 2 шт. по 50w + 30% (жрут 50 ватт а светят еще мощнее на 30 процентов, во блин до чего техника дошла) :) Так же нам для установки понадобится реле стандартное 4-х контактное, типа как для сигнала используется или для фар (ближний/дальний), несколько метров проводки, фишки типа «мама»,

Дороги (как и все российские) грязные и фары постоянно забрызгиваются грязью из-за чего приходится постоянно выходить и протирать их. Между тем раньше же на вазы ставили фароочистители с завода, но потом почему то отказались от этой опции. Вот и решил я поставить на свою машину родные фароочистители. Для их установки нам понадобится: Двигатели фароочистителей 2 шт(левый и правый они не взаимозаменяемые)

Нам понадобятся следующие компоненты: Электропривод для замка с причиндалами, все они идут в комплекте вместе с ним! Обязательно проверьте комплектацию, мне пытались спихнуть замок без крепежа (типа забыли положить) но тогда усложняется процесс установки 🙂 Так же нам понадобится обыкновенное реле (4 или 5 контактное неважно, нам нужно только 4 из них): и еще пару метров провода, разъемы типа «мама» и в

Все началось с того, что я как-то протер включенную фару снегом… Проще говоря, стекло треснуло. Вот я и решил, раз уж новое стекло вклеивать, то сделаю и белые поворотники заодно. В процессе подготовки и чтений форума выяснилось, что фары на 2105-07 бывают разные… назовем их «нового» и «старого» образца. На фаре «нового» образца рассеиватель ваз 2104 поворотника откручивается (ничего сложного в его удалении

Всем нам отлично известно как закрываются двери на жигулях, особенно на классике, и как бы вы не регулировали замки, все равно чего-то путного очень трудно добиться. Поэтому предлагаю рассмотреть процесс установки дверных замков от переднеприводных ВАЗов на классику. Начнем установку с водительской двери. Для этого нам понадобятся: 1. Сам замок (запирающий механизм). 2. Защёлка (наружная часть замка…

Приобретя 2107 я ни секунды не сомневался, что поставлю в него люк. Опыт установки люков у меня уже был. В качестве первого подопытного в установке люка была моя ВОЛГА ГАЗ-21. И первый блин не получился комом. Поездив на Волге с люком, и проникся всей прелестью этого прекрасного предмета. Так вот после Волги, был МОСКВИЧ-2140 (не мой). Люки для волги и москвича были куплены в магазине, по словам продавца это

Петли Ауди А4 (ауди 80, 90, пассат Б5 по смыслу такие же) приспособили под нашу крышку ваз 2107. На саморезы не смотрите, ночью сварщики спят , поэтому пока так. Металлическую пластину прикрутили к крылу, к ней петли, наверх крышку. Ессесно 52 раза отмерив, приложив, прикинув предварительно. ВАЖНО! Петли должны быть строго параллельны друг другу. То есть, если ровную пластину просто прикрутить к крылу — будет лажа,

После 3-х лет использования, взятого с нуля, моего «Урагана» — захотелось малость тишины и покоя в салоне. К тому же и время уже подходило повторной антикор обработки, да и просто было интересно заглянуть под «ковры» на предмет чего там творится. Бюджет затеи, сразу оговорюсь, старался свести к минимуму, но при этом не проиграть в качестве. А по сему, накануне пасхально-майских праздников, сбегал в магазин и

Когда я приобрел эту машину, первым делом я затонировал задние стекла. Расписывать преимущества тонировки не буду, думаю каждый сам для себя уже давно сделал выводы зачем ему это нужно/не нужно, ибо на автофорумах время от времени постоянно возникают «жаркие» споры — тонировка это зло или добро, вред или польза… Для меня доводы «за» тонировку оказались гораздо весомее чем доводы против и собственно

В инете читал много полезного и не очень, кое-что применил, кое-что поставил и потом снял, в любом случае авторам и критикам большое спасибо! Вот, наконец, созрел до описания собственного опыта. Может, и тема не всем интересная, но это мой дебют, так что прошу ногами не бить, критику восприму с достоинством и здоровой долей пофигизма. Писал больше для людей, которые очень хотят, но мало представляют, что к чему,

И так решил я сделать данную разработку для своего авто (а чем мы хуже всяких последних иномарок с диодными стопами). Ведь всем известно что диод загарается гораздо быстрее и светит гораздо ярче стандартных лам накаливания, да и срок его службы в десятки раз дольше. И так покупаем с магазине Чип и Дип (ну или на рынке) диоды диаметром 5 или 10 миллиметров. В моем случае я решил брать по принципу чем больше

Логика работы проста — при включении зажигания загорается ближний свет с габаритами (для этого и нужен диод), при включении дальнего ближний отключается, при выключении зажигания ваз 2107 ближний гаснет. Навеяно автоматическим реле «Энергомаш» и севшем однажды аккумулятором. Схема проста. Нужно одно дополнительное реле с пятью контактами. Обмотка реле подключается параллельно обмотке реле дальнего



Самостоятельный тюнинг ВАЗ 2104 своими руками

Многие люди мечтают не просто купить хорошую машину. Хочется, чтобы на общем фоне именно твой автомобиль как-нибудь выделялся и привлекал внимание окружающих. Именно поэтому часто автовладельцы прибегают к тюнингу. И сейчас миф о том, что тюнинг является развлечением богатых мира сего, уже развеян. Ведь в каждом специализированном магазине можно найти много всего интересного для своей машины ВАЗ 2104 и при этом по доступной цене.

Что же можно сделать с кузовом? Многие начинают с тонировки стекла. При этом каждый может выбрать на своё усмотрение цвет и яркость тонировки. И если есть хотя бы небольшой опыт в этом деле, то тонировку можно провести самостоятельно. Если же есть сомнения в том, стоит ли делать тюнинг ВАЗ своими руками, то лучше всё же обратиться к специалистам.

Когда тонировка сделана, можно заняться и изменением формы кузова. Эта работа требует навыков автослесаря 6-го разряда. При этом нет необходимости в том, чтобы просто при помощи болгарки разворотить свою машину, так как в магазинах можно найти специальные накладки, которые крепятся к автомобилю.

Чтобы придать своей машине эффектный внешний вид, можно нанести на кузов аэрографию. И если вы не художник, то доверьтесь профессионалам, которые нанесут на ваше авто такую реалистичную картинку, что все будут просто оборачиваться на неё на улице. А выбор картинки конечно же остаётся за владельцем машины.

Как же можно интересным образом преобразить салон ВАЗ 2104? Советуем посмотреть ролики из категории тюнинг видео, для того чтобы иметь представление на сколько это труджоёмкий процесс. Например, можно обшить сиденья красивой кожей или другим материалом, который нравится, комбинируя при желании и несколько тканей. Также отлично в салоне будут смотреться и карбоновые вставки. Карбон представляет собой особую ткань, которая состоит из углеродных волокон, которые покрыты сверху эпоксидной смолой. Именно этот материал многие рекомендуют для проведения тюнинга.

Когда машина сверкает изнутри и снаружи, то можно заняться тем, чтобы увеличить её мощность. Для этой цели обычно в двигатель вносят некоторые изменения. Усилить мощность авто можно двумя путями: путём расточки цилиндров или же увеличением хода поршневой. Конечно же, все эти процедуры лучше проводить на хорошем СТО.

Чтобы с усиленной мощностью было легко удержать машину на дороге, нужно обратить внимание на подвеску – заменить обычные стойки на спортивные, оснащённые двумя пружинами.  После замены их необходимо отрегулировать, что тоже стоит доверить специалистам.

Challenger TerraGator 2104 8.1 301HP тюнинг

Почему стоит выбрать MyChipTuningfiles

  • 100% гарантия индивидуального тюнинг файла;
  • Протестировано и разработано на испытательном стенде Maha;
  • Наилучшие характеристики и результаты в пределах безопасности;
  • Снижение расхода топлива.

ТерраГатор 2104 8.1 301 л.с.

Характеристики двигателя

Мощность, л.с. 301 л.с. Обработка Обработка
Крутящий момент, Нм 1413 Н·м Обработка Обработка
Мощность кВт 221 кВт Обработка Обработка
Мощность, л.с. 301 л.с. Обработка Обработка
Крутящий момент, Нм 1413 Н·м Обработка Обработка
Мощность кВт 221 кВт Обработка Обработка
Вид топлива Степень сжатия
Содержимое баллона 0 Диаметр x Ход
ЭБУ двигателя Номер двигателя

Дополнительные возможности настройки

Вы можете настроить файл настройки с помощью этих дополнительных функций настройки

Чип-тюнинг двигателя на 301 л.с.

My Chiptuning files специализируется на оптимизации бензиновых и дизельных двигателей для повышения производительности и топливной экономичности.У нас есть многолетний опыт настройки сельскохозяйственных двигателей Challenger для оптимизации производительности и эффективности.

Процесс

Мы анализируем ваш трактор и можем настроить программу управления двигателем, также известную как ECU (блок управления двигателем) . Это программное обеспечение двигателя в значительной степени отвечает за поведение двигателя TERRAGATOR 2104 8.1 301HP и его расход топлива. Мы можем оптимизировать ЭБУ для любого трактора.

Преимущества

В случае ТЕРРАГАТОРА 2104 8.1 301 л.с. 301 л.с., наш файл чип-тюнинга настроен для увеличения мощности и более плоского крутящего момента, снижения расхода топлива и улучшения отклика дроссельной заслонки. Благодаря оптимизации кривой крутящего момента двигатель TERRAGATOR 2104 8.1 мощностью 301 л.с. обеспечивает больший крутящий момент при более низких оборотах. Это также означает, что вы можете переключать передачи раньше, поэтому ваш двигатель Challenger будет работать на более низких оборотах и, следовательно, более эффективно.

Многие компании, занимающиеся чиптюнингом двигателей по всему миру, выбирают файлы My Chiptuning для настройки своих двигателей Challenger.Наш файл чип-тюнинга двигателя TERRAGATOR 2104 8.1 301HP обеспечивает наилучшую производительность и результаты в пределах исходных запасов безопасности.

Настройка окислительно-восстановительного потенциала посредством дифференциального связывания хинона в фотосинтетическом реакционном центре Rhodobacter sphaeroides «Убихинон является неотъемлемой частью цепи переноса электронов в клеточном дыхании и фотосинтезе у огромного количества организмов.Предыдущие экспериментальные результаты показали, что фотосинтетический реакционный центр (РЦ) Rhodobacter sphaeroides полностью функционален только с ограниченным набором метоксисодержащих хинонов, что позволяет предположить, что специфические взаимодействия с этим заместителем необходимы для управления транспортом электронов и образованием хинола. Природа этих взаимодействий еще не установлена. Посредством параметризации CHARMM-совместимого силового поля хинона и последующего моделирования молекулярной динамики связанного с хиноном RC мы исследовали и охарактеризовали взаимодействия белка с хинонами в сайтах QA и QB, используя как моделирование равновесия, так и термодинамическую интеграцию.В частности, мы идентифицировали специфическое взаимодействие между 2-метоксигруппой убихинона в сайте QB и амидным азотом GlyL225, которое, как мы предполагаем, блокирует ориентацию 2-метоксигруппы, тем самым регулируя разность окислительно-восстановительных потенциалов между хинонами, занимающими сайты QA и QB. Нарушение этого взаимодействия приводит к более слабому связыванию аналога убихинона, в котором отсутствует 2-метоксигруппа, что подтверждается экспериментами по парамагнитному резонансу электронов с обратным переносом электронов Q-AQ-B бирадикального и конкурентного связывания.»,

автор = «Вермаас, {Джош В.} и Тагучи, {Александр Т.} и Диканов, {Сергей А.} и Райт, {Колин А.} и Эмад Тайхоршид»,

примечание = «Авторское право издателя : {\ textcopyright} Американское химическое общество, 2015 г.»,

год = «2015»,

месяц = ​​март,

день = «31»,

doi = «10.1021/acs.biochem.5b00033»,

язык = «английский (США)»,

том = «54»,

страницы = «2104—2116»,

журнал = «Биохимия»,

issn = «0006-2960»,

издатель = «Американское химическое общество»,

номер = «12»,

}

Настройка активности β-катенина необходима для стабилизации самообновления эмбриональных стволовых клеток крыс | Стволовые клетки

Аннотация

Стабилизация β-катенина путем ингибирования активности киназы гликогенсинтазы 3 (GSK3) в сочетании с ингибированием митоген-активируемой киназы протеинкиназы 1/2 (MEK) способствует самообновлению эмбриональных стволовых клеток мыши наивного типа ( ЭСК).Однако в более продвинутых в развитии стволовых клетках эпибласта праймированного типа активность β-катенина индуцирует дифференцировку. Мы исследовали реакцию ЭСК крыс на передачу сигналов β-катенина и обнаружили, что при содержании в поддерживающих фидерных клетках в присутствии одного ингибитора МЕК (культура 1i) эффективность образования, рост, кариотипическая стабильность, профиль транскрипции и потенциал дифференцировки культур ЭСК крысы была аналогична таковой для клеточных линий, созданных с использованием как ингибиторов МЕК, так и ингибиторов GSK3 (культура 2i).Эквивалентные ЭСК мыши, для сравнения, дифференцировались в идентичных условиях 1i, что согласуется с недостаточной активностью β-катенина. Это межвидовое различие в зависимости от ингибирования GSK3 соответствовало более высоким общим уровням активности β-катенина в ЭСК крыс. В самом деле, ЭСК крыс демонстрируют широко распространенную экспрессию связанных с мезэнтодермой мишеней β-катенина, Brachyury и Cdx2 в среде 2i, и явную дифференцировку при дальнейшем увеличении активности β-катенина. Напротив, ЭСК мыши были устойчивы к дифференцировке при таких же повышенных дозах ингибитора GSK3.Интересно, что без фидерной поддержки умеренные уровни ингибирования GSK3 необходимы для поддержания эффективного роста ЭСК крысы, что подтверждает законсервированную роль β-катенина в самообновлении ЭСК. Эта работа идентифицирует передачу сигналов β-catenin как молекулярный реостат в ESC крысы, регулирующий самообновление дозозависимым образом, и подчеркивает потенциальную важность контроля потока в этом сигнальном пути для достижения эффективной стабилизации наивной плюрипотентности.

Введение

Недавний успех в получении компетентных эмбриональных стволовых клеток зародышевой линии крысы (ЭСК) прокладывает путь для применения современных методов генной инженерии к лабораторным крысам, одной из наиболее важных и широко используемых экспериментальных моделей для изучения биологии позвоночных и болезней человека. 1-5].Этот прорыв был достигнут с использованием новой культуральной среды, в которой химические ингибиторы сигнальных путей, регулируемых Ras/внеклеточным сигналом (ERK) и GSK3, используются для подавления дифференцировки стволовых клеток и поддержки непрерывной экспансии плюрипотентных ЭСК [6]. Эта система двойного ингибитора также может быть использована для получения линий ЭСК от линий мышей, ранее считавшихся непермиссивными для выделения ЭСК, и для стабилизации размножения наивноподобных плюрипотентных стволовых клеток, не индуцированных грызунами (ИПСК)/ЭСК, когда они сконструированы для сверхэкспрессии экзогенных стволовых клеток. факторы [7-9].Однако еще предстоит установить, обеспечивает ли использование культуральной среды на основе двух ингибиторов (2i) общий подход к получению нормальных ЭСК наивного типа из других эмбрионов млекопитающих. Улучшение понимания того, как условия культивирования 2i влияют на состояние ЭСК, поможет дальнейшей разработке и уточнению стратегий выделения настоящих наивных ЭСК млекопитающих.

Важность передачи сигналов Ras/ERK в дифференцировке мышиных ECS (mESC) была раскрыта посредством генетического и фармакологического нарушения пути [10-12].Блокирование активности MEK, вышестоящего активатора ERK, в бессывороточной среде с определенным химическим составом устраняло незапланированную дифференцировку и позволяло самообновляться mESC без дополнительного воздействия экзогенных факторов, таких как фактор, ингибирующий лейкемию (LIF) или костный морфогенный белок 4. БМП4) [6, 13]. Однако одной эффективной блокады активности MEK, особенно в культурах с низкой плотностью, недостаточно для обеспечения эффективного выживания клеток. Это ограничение было преодолено путем комбинирования ингибирования MEK с блокированием активности GSK3, критического регулятора передачи сигналов Wnt, что способствовало эффективной экспансии mESCs даже при клональной плотности [6].

Первоначально сообщалось, что ингибирование GSK3 стимулирует пролиферацию как мЭСК, так и ЭСК человека [14]. Однако эта роль в регуляции роста и дифференцировки ЭСК была противоречивой, отчасти из-за нецелевых эффектов, связанных с BIO, низкомолекулярным ингибитором GSK, использовавшимся в первоначальных исследованиях, и общей ролью, которую играет GSK3 в регуляции клеточного метаболизма [6, 15-15]. 17]. Последующая переоценка функции GSK3 в недавних исследованиях с использованием линий mESC с дефицитом ключевых компонентов пути Wnt/β-catenin выявила прямую роль передачи сигналов GSK3 и β-catenin в регуляции наивного состояния ESC [18-21].В своей простейшей интерпретации ингибирование GSK3 с помощью Wnt или низкомолекулярных ингибиторов, таких как CHIR99021 (CH), стабилизирует β-катенин, который, в свою очередь, связывается с Т-клеточным фактором 3 (TCF3), сводя на нет ингибирующие эффекты этого репрессора транскрипции на ключевые мишени. регуляторной сети плюрипотентности, такой как Nanog, Tbx3 и Esrrb [19]. Ограничение активности TCF3 затем блокирует переход mESC наивного типа в состояние «примированных» стволовых клеток эпибласта (EpiSC), тем самым предотвращая дифференцировку. Примечательно, что ни активация β-catenin, ни ингибирование MEK сами по себе недостаточны для предотвращения дифференцировки mESC, но либо в комбинации, либо по отдельности в сочетании с передачей сигналов LIF будут поддерживать самообновление mESC.В самом деле, тот факт, что β-catenin-дефицитные mESCs легко размножаются в культуре, дополнительно демонстрирует, что потребность в передаче сигналов β-catenin зависит от контекста [18].

Активный вклад передачи сигналов Wnt/β-catenin в самообновление mESC подчеркивает важное различие между действиями двух ингибиторов, используемых в культуре 2i. В то время как инактивация MEK напрямую блокирует активность в пути дифференцировки фактора роста фибробластов (FGF)/ERK, ингибирование GSK3 выключает конститутивную репрессивную активность, что приводит к хронической активации нижестоящих сигналов, таких как β-катенин.Таким образом, определение подходящего уровня ингибирования GSK3 является потенциально более сложной задачей и может потребовать корректировки в зависимости от контекста. В соответствии с этой возможностью, хроническое ингибирование активности GSK3, как сообщается, влияет на выравнивание и стабильность хромосом [22, 23], а конститутивно высокие уровни β-катенина могут нарушать нормальные физиологические паттерны взаимодействия с нижестоящими коэффекторами, такими как TCF [24]. ].

В этом отчете мы исследовали потребность в rESC для ингибиторов 2i, сосредоточив внимание как на передаче сигналов GSK3/β-катенина, так и на том, как ответ наивных крысиных ESC сравнивается с ответом стволовых клеток, полученных аналогичным образом, полученных от мыши.Хотя rESC обычно размножают в стандартной среде 2i [1-5, 25], мы обнаружили, что их потребность в ингибировании GSK3 отличается от потребности mESC. Похоже, что крысиные ESC (rESC) обычно демонстрируют более высокие уровни передачи сигналов β-catenin, чем mESC. Это влияет на их реакцию на ингибирование GSK3 и может способствовать их самообновлению в условиях, которые не могут поддерживать рост эквивалентных, наивных ESC, полученных от мыши.

Материалы и методы

Заявление об этике

Работа с животными соответствовала руководящим принципам животноводства в соответствии с Министерством внутренних дел Великобритании и одобрена Комитетом по этике животных Института Рослина.Животных спаривали естественным образом и умерщвляли по схеме 1; процедуры, не требующие специального разрешения Министерства внутренних дел.

Получение и культивирование рЭСК и мЭСК

Происхождение, культивирование и дифференцировка ЭСК были такими же, как описано ранее у Meek et al. [26], с небольшими изменениями, указанными ниже. Клетки культивировали на γ-облученных (5 Гр) мышиных фибробластах DIA-M в 1i (N2B27 + 1 мкМ PD0325901 [PD]) или 2i (N2B27 + 1 мкМ + 3 мкМ CHIR99021 [CH]). Колонии пассировали каждые 2-3 дня на TVP (0.0,25 % трипсина, 1 % куриной сыворотки и 1 мМ ЭДТА) и высевали с плотностью 0,5–1 × 10 5 на квадратный сантиметр. Культуры без фидера высевали в лунки, покрытые 10 мкг/мл ламинина (Sigma http://www.sigmaaldrich.com). Ингибиторы MEK и GSK3 поставлялись компаниями Axon Medchem (http://www.axonmedchem.com), Stemgent (https://www.stemgent.com) и Sigma. FH535 и кверцетин поставлялись Sigma.

Векторная конструкция

Мутантная кДНК β-катенина человека, S33, была амплифицирована методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) [27] (NEB, phusion), TOPO клонировано в вектор pCR8/GW/TOPO Gateway Entry (Life Technologies, Rockville, MD, http: //www.lifetech.com), и последовательность проверена перед клонированием в вектор экспрессии pCAGGs-IP, модифицированный Gateway, с использованием рекомбиназы LR (Life Technologies).

Стабильная трансфекция

rESC (5 × 10 5 ) трансфицировали 500 нг мутанта S33 β-катенина или вектора экспрессии eGFP с использованием липофектамина LTX (Life Technologies). Затем клетки повторно высевали в течение 36 часов после трансфекции и применяли селекцию пуромицином (0,5 мкг/мл) еще в течение 4 дней для получения стабильных трансфектантов.

Анализ пролиферации клеток

Клетки

высевали в повторах с плотностью 1,5 × 10 4 на лунку в лунки 96-луночного планшета. Пролиферацию клеток анализировали с использованием набора CyQuant (Invitrogen) через 24, 48 и 72 часа в соответствии с инструкциями производителя.

Анализ колоний

Клетки

2 × 10 3 высевали на фидеры в лунку 4 см 2 в 1 мкМ PD, содержащем 0, 3 или 6 мкМ CH, в течение 6 дней.Все колонии были окрашены на щелочную фосфатазу и оценены как одинаково низкие, смешанные или одинаково высокие в зависимости от степени окрашивания.

ПЦР с обратной транскриптазой в реальном времени

РНК

(1 мкг), очищенную с использованием RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany, http://www1.qiagen.com), использовали для синтеза кДНК с использованием системы синтеза первой нити SuperScript (Invitrogen, Carlsbad, CA, http:/ /www.invitrogen.com). Приблизительно 1/60 кДНК амплифицировали с использованием набора Platinum SYBR Green QPCR (Invitrogen) в следующих условиях; 50°C в течение 2 минут, затем 95°C в течение 2 минут, затем 40 циклов 95°C в течение 15 секунд, затем 60°C в течение 30 секунд, с последним циклом, состоящим из 95°C в течение 1 минуты, 60°C в течение 30 секунд и 95°C в течение 15 секунд.

Анализ кариотипа

Клетки

культивировали в течение 2 часов в 0,1 мг/мл колцемида, набухали в 0,56% гипотоническом растворе KCl и фиксировали на льду в смеси метанол:уксусная кислота, 3:1. Метафазные спреды готовили на предметных стеклах и окрашивали по Гимзе.

Микрочип

РНК собирали из трех независимых линий 1i и 2i. Перед сбором каждая линия была разделена на девять лунок (по три лунки в каждой из трех шестилуночных планшетов). Каждая пластина состояла из одной линии 1i и одной линии 2i.Один повтор из каждого планшета объединяли, чтобы получить в общей сложности три повтора для каждой клеточной линии. Дубликаты для каждой линии гибридизовали с матрицей Affymetrix Rat Gene 1.1 ST. Данные Affymetrix были нормализованы и суммированы с использованием надежного метода усреднения по нескольким массивам [28], а затем для усреднения сгруппированных повторных анализов использовалась версия 7 GeneSpring GX (Agilent, Пало-Альто, Калифорния, окончательная визуализация результатов экспрессии. Гены-кандидаты были отобраны с использованием фильтрации среднего кратного изменения с двукратным порогом.

Анализ люциферазы

Клетки

высевали с плотностью 0,75 × 10 5 на см 2 и трансфицировали 360 нг репортерной плазмиды (SUPERTOPFLASH или FOPFLASH) и 6,25 нг pEF1α-renilla [29] с использованием реагентов Lipofectamine LTX и PLUS (Invitrogen). Культуры лизировали через 48 часов и анализировали с использованием репортерной системы Dual-Luciferase (Promega, Madison, WI, http://www.promega.com). Уровни люциферазы нормализовали по активности renilla, и данные представлены как отношение активности SUPERTOPFLASH к активности FOPFLASH.

Поколение Химер

Бластоцисты крыс на E4,5 дней после полового акта собирали к полудню дня инъекции и культивировали в течение 2–3 часов в среде для культивирования эмбрионов KSOM для обеспечения кавитации. Клетки дезагрегировали в TVP, осаждали в N2B27, затем ресуспендировали в N2B27, содержащем 1 М буфер HEPES, и хранили на льду перед инъекцией. В бластоцисты вводили 10–12 клеток, которые затем переносили в матку псевдобеременных крыс Sprague Dawley.

Нокдаун киРНК

рЭСК трансфицировали при плотности 0.5–5 × 10 4 на см 2 с β-катенином (Ambion, Austin, TX, http://www.ambion.com, s136458, s136459 и s136460), аденоматозный полипоз толстой кишки (APC) (s127456 ) или отрицательный контроль (Ambion, 43) малая интерферирующая РНК (миРНК) в конечной концентрации 20–160 нМ с использованием липофектамина LTX (2,25 мл LTX + 0,75 мл реагента PLUS, Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Также использовали изготовленную на заказ миРНК отрицательного контроля, в которой четыре замены оснований G на C были введены в последовательность siРНК β-катенина s136459 (GCAUG G A GG AGAUA G UUGATT).Реагенты для трансфекции удаляли через 16 часов после трансфекции, и клетки культивировали еще в течение 2 дней перед сбором на РНК или еще в течение 5 дней перед окрашиванием на щелочную фосфатазу (Sigma, 86R-1KT).

Иммуноокрашивание

Клетки

фиксировали 4% параформальдегидом, пермеабилизировали метанолом при -20°C и блокировали 10% (об./об.) эмбриональной телячьей сывороткой (FCS) в течение 1 часа. Первичные антитела наносили в 2% FCS (об./об. в фосфатно-солевом буфере: PBS) на ≥2 часов при комнатной температуре.Вторичные антитела наносили на 1 час в темноте с последующим трехкратным озолением с PBS. Затем окрашенные клетки помещали в Vectashield (Burlingame, CA, http://www.vectorlabs.com) и получали изображения с использованием конфокального микроскопа NIKON EC-1. Антитела представляли собой: анти-Brachyury(C-19) (Santa Cruz Biotechnology, Санта-Крус, Калифорния, http://www.scbt.com, sc-17745), анти-Cdx2 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, http ://www.cellsignal.com, 3977), анти-Oct3/4 (C-10) (Санта-Крус, sc-5279), анти-Nanog (Abcam, Cambridge, U.К., http://www.abcam.com, ab80892).

Интервальная съемка

Клетки

культивировали на фидерах в среде 2i+LIF в течение 24 часов. Среду заменяли на среду 2i, содержащую 9 мкМ CH (Stemgent), и каждые 30 минут в течение 4 дней проводили цейтраферные записи с использованием системы Zeiss Live Cell Observer.

Результаты

Стабильное размножение аутентичных линий рЭСК может быть достигнуто при использовании среды 2i в сочетании с фидерными опорными клетками [1, 2].Чтобы оценить степень, в которой rESC зависят от химической блокады путей, регулируемых MEK и GSK3, мы оценили рост установленной линии rESC [1] на фидерах в среде, где мы варьировали концентрацию ингибиторов MEK или GSK3. Снижение концентрации ингибитора MEK PD уменьшало размер колоний и количество клеток, одновременно увеличивая признаки дифференцировки и клеточного дебриса, что указывает на то, что rESC не развиваются, когда активность MEK беспрепятственна (вспомогательная информация, рис. S1A, S1B). Напротив, отмена CH не оказывала заметного влияния на рост клеток или экспрессию маркеров стволовых клеток, что указывает на то, что укоренившаяся линия rESC легко переносила удаление ингибитора GSK3 (вспомогательная информация, рис.S1B–S1D).

Чтобы выяснить, можно ли распространить эффективный рост в среде, содержащей только ингибитор МЕК (1i), на получение линий de novo, мы сравнили эффективность выделения ЭСК из эмбрионов трех линий крыс в среде 1i и 2i. Для штаммов DA и Lewis не было большой разницы в эффективности, с которой линии ЭСК приживались в среде 2i и 1i (вспомогательная информация, таблица S1). Небольшое снижение успешности с линиями SD, несмотря на общую высокую эффективность получения линий rESC в среде 1i на фидерах, указывает на то, что установление и размножение rESC не требует химического ингибирования активности GSK3.

Чтобы оценить фенотип rESC 1i, мы сравнили идентичность стволовых клеток и рост трех отдельных линий rESC DA, полученных в среде 1i или 2i. 1i rESC образовывали компактные колонии стволовых клеток, аналогичные колониям в среде 2i (рис. 1А). Недифференцированный статус этих клеточных линий 1i был подтвержден транскрипцией маркеров ESC Oct4 , Nanog , Sox2 , Rex1/ZFP42, Klf2 и Klf4 на уровне, сходном с соответствующими культурами (рис. 2i). .1Б). Белки Oct4 и Nanog были обнаружены в ядрах 1i rESC (рис. 1С). Мы также сравнили скорость роста соответствующих линий 1i и 2i в течение 5-дневного периода культивирования. За исключением немного более быстро растущей линии DA27 1i, клеточные линии 1i и 2i показали эквивалентную скорость роста, что еще раз подтверждает, что rESC, культивируемые на кормушках, легко переносят отсутствие ингибитора GSK3 (Fig. 1D).

Рисунок 1.

Получение зародышевой компетентной эмбриональной стволовой клетки крысы (rESC) в отсутствие CHIR99021. (A): изображений DA rESC в светлом поле, полученных в 1i (1 мкМ PD0325901) или 2i (1 мкМ PD0325901 + 3 мкМ CHIR99021). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (qRT-PCR) на маркеры ESC в rESC 1i и 2i. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (C): Иммуноокрашивание для Oct4 (средние панели) и Nanog (правые панели) в rESC 1i и 2i (увеличение ×100). (D): Анализ пролиферации трех независимых линий 1i и 2i.Среднее значение и стандартное отклонение трех экспериментальных повторностей. (E): Иммуноокрашивание на Nestin и Tuj1 (левая панель) и скелетный миозин (правая панель) после 11-дневного протокола дифференцировки нейронов или миогенного монослоя соответственно (увеличение ×100). (F): Фотография химерной матери DA27 с пигментированным зародышевым потомством и однопометником-альбиносом. Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Рисунок 1.

Получение зародышевой компетентной эмбриональной стволовой клетки крысы (rESC) в отсутствие CHIR99021. (A): изображений DA rESC в светлом поле, полученных в 1i (1 мкМ PD0325901) или 2i (1 мкМ PD0325901 + 3 мкМ CHIR99021). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (qRT-PCR) на маркеры ESC в rESC 1i и 2i. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (C): Иммуноокрашивание для Oct4 (средние панели) и Nanog (правые панели) в rESC 1i и 2i (увеличение ×100). (D): Анализ пролиферации трех независимых линий 1i и 2i.Среднее значение и стандартное отклонение трех экспериментальных повторностей. (E): Иммуноокрашивание на Nestin и Tuj1 (левая панель) и скелетный миозин (правая панель) после 11-дневного протокола дифференцировки нейронов или миогенного монослоя соответственно (увеличение ×100). (F): Фотография химерной матери DA27 с пигментированным зародышевым потомством и однопометником-альбиносом. Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Предполагается, что анеуплоидия, наблюдаемая в культурах rESC, может быть связана с хроническим ингибированием активности GSK3 [2].Поэтому мы сравнили количество хромосом в культурах rESC 1i и 2i на ранних и поздних пассажах и при низкой плотности посева и обнаружили одинаковый общий процент эуплоидных клеток в различных культуральных средах, предполагая, что добавление ЦГ не оказало значительного влияния на кариотип. стабильность в rESC (вспомогательная информация, рис. S2A, S2B). Однако снижение кариотипической стабильности, наблюдаемое в культурах с низкой плотностью, указывает на то, что аутокринные факторы или межклеточные контакты важны для поддержания роста rESC даже в присутствии фидерных клеток.

Потенциал развития rESC 1i исследовали путем оценки их способности к дифференцировке in vitro и in vivo. Анализ маркеров дифференцировки в выростах тел эмбриоидов показал, что в культурах 1i образуются производные всех трех зародышевых листков, включая энтодерму ( Sox17 , Afp ), мезодерму ( Brachyury , Kdr1 ) и эктодерму ( Nestin

). Pax6 ) (дополнительная информация, рис. S2C). 1i монослойные культуры также генерировали нестин-позитивные нейральные предшественники и нейроны, а также производные мезодермы, такие как скелетные мышцы (рис.1Е). Потенциал развития клеток 1i in vivo тестировали путем инъекции бластоцисты и образования химеры. Используя бластоцисты штамма альбиносов с «капюшоном» в качестве эмбрионов-хозяев, мы получили химеры окраски шерсти с двумя клеточными линиями 1i DA, которые демонстрировали типичный фенотип окраски «обратно-капюшон», характерный для химер между пигментированными штаммами альбиносов с капюшоном и без капюшона (таблица 1, рис. 1F) [30]. При спаривании с крысами-альбиносами две химеры RIDA27 1i произвели детенышей агути, демонстрирующих передачу ЭС клеток 1i через зародышевую линию (рис.1F, таблица 1). Это было подтверждено микросателлитным анализом ДНК, полученной из образцов тканей (вспомогательная информация, рис. S2D). Вклад 1i rESC в химеры, включая зародышевую линию, приближался к эффективности, полученной нами с установленной клеточной линией 2i [31] (таблица 1), подтверждая, что ингибирование передачи сигналов MEK только в присутствии фидеров позволяет эффективно получать и размножать аутентичные РЭСК.

Таблица 1.

Эффективность передачи химеры и зародышевой линии

5 1 9002 9-18 0 B
Клеточная линия . Секс . Проход . Передано . Родился . Химеры . Секс . ГЛТ .
DA27 (1i) F 633 186 (29%) 25 (13%) 25 (13%) 11F A 2/10
DA38 (1i) F 7, 11 7, 11 25 (68%) 17 (12%) 2 (12%) 1F 0/1 C
Dak31 (2i + Lif) M 18-20 178-20 178 62 (35%) 21 (34%) 21 (34%) 21 (34%) 10 м 4/10
00
00 2 5 1 9002 9-18 0 B
клеточная линия . Секс . Проход . Передано . Родился . Химеры . Секс . ГЛТ .
DA27 (1i) F 633 186 (29%) 25 (13%) 25 (13%) 11F A 2/10
DA38 (1i) F 7, 11 7, 11 25 (68%) 17 (12%) 2 (12%) 1F 0/1 C
Dak31 (2i + LIF) M 18-209 178-20 178 62 (35%) 21 (34%) 21 (34%) 10 м 4/10
Таблица 1.

Эффективность передачи химеры и зародышевой линии

5 1 9002 9-18 0 B
Клеточная линия . Секс . Проход . Передано . Родился . Химеры . Секс . ГЛТ .
DA27 (1i) F 633 186 (29%) 25 (13%) 25 (13%) 11F A 2/10
DA38 (1i) F 7, 11 7, 11 25 (68%) 17 (12%) 2 (12%) 1F 0/1 C
Dak31 (2i + Lif) M 18-20 178-20 178 62 (35%) 21 (34%) 21 (34%) 21 (34%) 10 м 4/10
00
00 2 5 1 9002 9-18 0 B

В свете недавних отчетов, описывающих решающую роль для сигнального пути Wnt/GSK3/β-катенин в поддержании наивного статуса мЭСК [18-21, 32] было важно более всесторонне сравнить молекулярный профиль культур 1i.Поэтому мы сравнили профили экспрессии мРНК трех клеточных линий, установленных в каждом состоянии роста с помощью микрочипа (рис. 2А и вспомогательные информационные таблицы S2 и S3, URL-ссылка на полный набор данных о принятии). Это показало, что паттерны транскрипции 1i и 2i были схожими: > 99% генов различались менее чем в 2 раза, а 255 генов различались между двумя состояниями. В соответствии с результатами количественной ПЦР с обратной транскриптазой (qRT-PCR), большинство маркеров, связанных с ЭСК, экспрессировались на эквивалентных уровнях.Двумя исключениями были факторы транскрипции Gbx2 и Otx2 , экспрессия которых была в 2,3 раза ниже и в 3,7 раза выше в культурах 1i соответственно (рис. 2А, 2Б). Хотя это различие может намекать на смещение клеток 1i в сторону праймированного состояния [33], данные исследований Xenopus предполагают, что Gbx2 и Otx2 являются непосредственно активированными и репрессированными мишенями передачи сигналов Wnt, соответственно [34]. Действительно, 166 генов, которые демонстрировали более высокую экспрессию в 2i, включают стандартные гены ответа на передачу сигналов Wnt Axin2 (2. Cdx1 (3 раза), а также транскрипционные факторы Brachyury и Cdx2 — два известных регулятора дифференцировки мезэнтодермы и маркеров примитивной полоски при ранней гаструляции [35, 36]. qRT-PCR подтвердил усиление экспрессии Brachyury и Cdx2 в культурах 2i (рис. 2B). Этот ответ на СН также наблюдался в клеточных линиях, независимо от пола, штамма или пассажа, подтверждая, что индукция Cdx2 и Axin2 была общей чертой рЭСК (вспомогательная информация, рис.S2E, S2F). Повышенная экспрессия РНК сопровождалась активацией Cdx2 и ядерного белка Brachyury во всех колониях 2i rESC (Fig. 2C, 2D). В целом эти молекулярные анализы подтвердили, что rESC приспосабливаются к отсутствию CH. Однако они также идентифицировали экспрессию маркеров дифференцировки, индуцированную присутствием ингибитора GSK в культурах 2i rESC.

Рисунок 2.

Активация экспрессии Brachyury и Cdx2 с помощью CHIR99021 в эмбриональных стволовых клетках крысы (rESC). (A): Диаграмма рассеяния данных экспрессии генов микрочипов, сравнивающих три линии 1i и три линии 2i rESC. (B): Количественная обратная транскриптаза полимеразная цепная реакция проверки данных микрочипа. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (C): Иммуноокрашивание двух линий 1i (DA27 и DA38) и двух линий 2i (DA18 и DA22) rESC на Oct4 (красный) и Cdx2 (зеленый) (увеличение ×400). (D): Иммуноокрашивание тех же линий rESC, что и панель (C), для Oct4 (красный) и Brachyury (зеленый) (увеличение ×400).Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Рисунок 2.

Активация экспрессии Brachyury и Cdx2 с помощью CHIR99021 в эмбриональных стволовых клетках крысы (rESC). (A): Диаграмма рассеяния данных экспрессии генов микрочипов, сравнивающих три линии 1i и три линии 2i rESC. (B): Количественная обратная транскриптаза полимеразная цепная реакция проверки данных микрочипа. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (C): Иммуноокрашивание двух линий 1i (DA27 и DA38) и двух линий 2i (DA18 и DA22) rESC на Oct4 (красный) и Cdx2 (зеленый) (увеличение ×400). (D): Иммуноокрашивание тех же линий rESC, что и панель (C), для Oct4 (красный) и Brachyury (зеленый) (увеличение ×400). Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Чтобы оценить, является ли рост в среде 1i, содержащей только ингибитор MEK, общим свойством ЭСК наивного типа, мы напрямую сравнили CH-зависимость линий mESC и rESC, полученных в идентичных условиях 2i. После четырех пассажей в среде 1и мЭСК, в отличие от рЭСК, проявляли признаки дифференцировки (рис. 3А). Колонии в среде 1i представляли собой либо небольшие гетерогенные агрегаты неправильной формы, либо группы уплощенных эпителиальных клеток, отличающиеся от компактных и однородных колоний, сформированных в среде 2i.Эти явные признаки дифференцировки сопровождались подавлением маркеров стволовых клеток, в том числе наивного ЭСК-специфического фактора транскрипции Rex1 (особенно заметно в линиях C57BL/6), а также резким повышением экспрессии «примированного» постимплантационного эпибласта/EpiSC-маркера . Fgf5 у всех линий (рис. 3Б). В отличие от рЭСК, культуры мЭСК также демонстрировали повышенную регуляцию Brachyury и Cdx2 в культуре 1i. Это убедительно свидетельствует о том, что даже при совместном культивировании с фидерными клетками ослабление ингибирования GSK3 в среде 1i вызывает дифференцировку mESC в сторону примированного состояния позднего эпибласта.Эти результаты свидетельствуют о том, что, в отличие от рЭСК, ингибирование МЕК вместе с факторами, происходящими из фидера, не может блокировать выход мЭСК из наивного состояния ЭСК, обратная ситуация, которая происходит в стандартных условиях культивирования сыворотка/LIF [1, 37].

Рисунок 3.

Дифференциальные ответы эмбриональных стволовых клеток мыши (m) и крысы (rESC) на изъятие CHIR99021. (A): Изображения rESC и mESC в светлом поле после культивирования в среде 1i или 2i для четырех пассажей (увеличение ×100). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой двух линий rESC и четырех линий mESC (двух линий CBA/C57BL/6 и двух линий OLA/129) после культивирования в течение четырех пассажей в среде 1i или 2i. Данные представлены как выражение 1i по отношению к 2i.

Рисунок 3.

Дифференциальные ответы эмбриональных стволовых клеток мыши (m) и крысы (rESC) на удаление CHIR99021. (A): Изображения rESC и mESC в светлом поле после культивирования в среде 1i или 2i для четырех пассажей (увеличение ×100). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой двух линий rESC и четырех линий mESC (двух линий CBA/C57BL/6 и двух линий OLA/129) после культивирования в течение четырех пассажей в среде 1i или 2i. Данные представлены как выражение 1i по отношению к 2i.

Более низкий уровень индукции Axin2 в культурах 2i mESC свидетельствует о том, что они в целом могут быть менее чувствительны к ингибитору GSK3, чем rESC (Fig. 3B). Чтобы сравнить дозозависимую реакцию мЭСК и реЭСК на ЦГ, мы оценили морфологию колоний и экспрессию стволовых клеток/маркеров дифференцировки в ЭСК, культивируемых в течение 3 дней на кормушках в 0.37–12 мкМ CH (рис. 4; вспомогательная информация, рис. S3). Как и ожидалось, rESC показали небольшие изменения в морфологии колоний до 3 мкМ CH (рис. 4A; вспомогательная информация, рис. S3A). Однако при более высоких концентрациях CH многие колонии уплощались, что свидетельствует о начале дифференцировки. Это морфологическое изменение сопровождалось заметным подавлением маркеров стволовых клеток и резким увеличением экспрессии Cdx2 и Brachyury (рис. 4B, 4C; вспомогательная информация, рис.С3Б). мЭСК образовывали уплощенные колонии в отсутствие CH, но становились все более компактными колониями по мере увеличения концентрации CH (рис. 4A; вспомогательная информация, рис. S3A). Интересно, что экспрессия как Cdx2 , так и Brachyury также индуцировалась в мЭСК в ответ на ЦГ (рис. 4В; вспомогательная информация, рис. S3B), но требовала более высоких концентраций, чем в рЭСК, а степень индукции была почти на порядок выше. величины ниже, чем в рЭСК при 6 и 12 мкМ CH.Кроме того, экспрессия Cdx2 и Brachyury в мЭСК не сопровождалась подавлением маркеров стволовых клеток, как это наблюдается в rESC (рис. 4B, 4C; вспомогательная информация, рис. S3B).

Рисунок 4.

Эмбриональные стволовые клетки мыши (m) и крысы (rESC) различаются по дозозависимой реакции на CHIR99021. (A): Изображения в светлом поле линии rESC DA22 (верхние панели) и линии mESC m1.1 (нижние панели), культивированных в 0 мкМ, 3 мкМ или 6 мкМ CH в течение 3 дней (увеличение × 100). (B): анализ qRT-PCR тех же линий rESC (верхняя панель) и mESC (нижняя панель), которые использовались в панели (A), культивированных в различных концентрациях CH в течение 3 дней. Уровни экспрессии нормализованы по сравнению с таковыми в 1i (0 мкМ CH). (C): Конфокальные изображения иммуноокрашенных rESC (левые панели) и mESC (правые панели) для Oct4 и Cdx2 после культивирования в 0 мкМ, 3 мкМ и 6 мкМ CH в течение 3 дней. (D): Количественное определение колоний крыс и мышей, окрашенных щелочной фосфатазой, образовавшихся при клональной плотности в 0, 3 и 6 мкМ CH.Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Рисунок 4.

Эмбриональные стволовые клетки мыши (m) и крысы (rESC) различаются по дозозависимой реакции на CHIR99021. (A): Изображения в светлом поле линии rESC DA22 (верхние панели) и линии mESC m1.1 (нижние панели), культивированных в 0 мкМ, 3 мкМ или 6 мкМ CH в течение 3 дней (увеличение × 100). (B): анализ qRT-PCR тех же линий rESC (верхняя панель) и mESC (нижняя панель), которые использовались в панели (A), культивированных в различных концентрациях CH в течение 3 дней.Уровни экспрессии нормализованы по сравнению с таковыми в 1i (0 мкМ CH). (C): Конфокальные изображения иммуноокрашенных rESC (левые панели) и mESC (правые панели) для Oct4 и Cdx2 после культивирования в 0 мкМ, 3 мкМ и 6 мкМ CH в течение 3 дней. (D): Количественное определение колоний крыс и мышей, окрашенных щелочной фосфатазой, образовавшихся при клональной плотности в 0, 3 и 6 мкМ CH. Сокращение: DAPI, диамидино-2-фенилиндол.

Чтобы дополнительно подтвердить различия между видами в ответ на ЦГ, мы сравнили мЭСК и реЭСК в анализе колоний при 0, 3 и 6 мкМ ЦГ (рис.4Д). В соответствии с экспрессией маркера стволовых клеток, rESC эффективно самообновлялись в отсутствие CH, но дифференцировались при 6 мкM CH, в то время как mESC демонстрировали противоположный ответ. Поскольку жизнеспособность колоний была снижена в rESC, обработанных высокими концентрациями CH, мы также проверили, может ли влияние на rESC быть связано с избирательным выживанием ранее существовавших дифференцированных клеток из исходных культур, выполнив цейтраферную микроскопию (вспомогательное информационное видео 1). . Следя за ростом rESC, становится ясно, что большинство колоний стволовых клеток дифференцируются при высоких концентрациях CH, и именно плохая выживаемость клеток, дифференцирующихся на более поздних стадиях культивирования, объясняет потерю колоний.

Видоспецифичная изменчивость ответа на CH указывает на различия в передаче сигналов, индуцированных ингибитором GSK3 в mESC и rESC. Чтобы убедиться, что продифференцирующие эффекты CH на rESC были опосредованы через GSK3, мы протестировали эффекты другого источника CH и другого ингибитора GSK3 BIO. Мы также проверили, влияет ли опосредованный siRNA нокдаун APC, каркасного белка, который координирует опосредованную GSK3 деградацию β-катенина, на самообновление rESC. В каждом случае вмешательство в ингибирование GSK3, измеряемое повышенной активностью β-катенина, коррелировало с потерей морфологии колонии стволовых клеток, активностью щелочной фосфатазы и подавлением маркеров стволовых клеток, таких как Nanog, в rESC (рис.5А, 5Б; Вспомогательная информация (рис. S4A–S4D). Чтобы выяснить, объясняют ли различия в активности β-катенина различия между mESC и rESC, мы измерили транскрипционную активность β-катенина непосредственно с помощью TCF-зависимого (TOPflash) репортерного анализа люциферазы. Оценка β-катенин-зависимой транскрипции в ЭСК, обработанных различными дозами ЦГ, измеряемая по отношению репортерной активности TOPflash к FOPflash, показала, что активность β-катенина увеличивалась дозозависимым образом в обоих ЭСК (рис.5С; Вспомогательная информация (рис. S4E). Однако активность β-катенина была как минимум в 2 раза выше в рЭСК по сравнению с мЭСК во всех условиях, в том числе в отсутствие ЦГ. Действительно, в среде, не содержащей CH, сравнение флэш-активности TOP:FOP в присутствии и в отсутствие фидеров показало, что rESC обладали примерно в 5 раз большей базовой активностью, чем mESC, на фидерах (рис. 5D). Этот фидер-зависимый ответ может быть подавлен опосредованным миРНК нокдауном β-катенина, подтверждая, что он был вызван активностью β-катенина (вспомогательная информация, рис.S4F, S4G).

Рисунок 5.

Эмбриональные стволовые клетки крысы (rESC) демонстрируют более высокие уровни тонической и индуцированной активности β-катенина, чем ESC мыши (m). (A): Окрашивание щелочной фосфатазой двух линий rESC (DA18 и DA22), культивируемых в 3 мкМ CHIR99021, 3 мкМ BIO или 3 мкМ CHIR + 3 мкМ BIO. (B): Окрашивание щелочной фосфатазой двух линий rESC (DA18 и DA22), трансфицированных либо отрицательной (-ve) контрольной siRNA, либо siRNA к APC. (C): График, показывающий соотношение активности TOPFlash:FOPFlash rESC и mESC, культивируемых в 0, 1.5, 3, 6 или 12 мкМ CH в течение 3 дней. (D): Гистограмма, показывающая соотношение активности TOPFlash:FOPFlash линий ЭСК крыс и мышей 2i, культивируемых в 1i (только PD) на ламинине или фидерных клетках. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (E – H): нокдаун siРНК β-катенина. Окрашивание щелочной фосфатазой (E) и количественный анализ полимеразной цепной реакции (qRT-PCR) (F) линий rESC, культивируемых в 1i в течение 6 дней при отборе на стабильную трансфекцию мутантом β-катенина (S33) или отрицательным контролем eGFP (C ) вектор.Низкое увеличение (левая панель) и высокое увеличение (средняя и правая панели, × 100) увеличение стабильно трансфицированных rESC. Остаточные трансфектанты S33 образовывали небольшие, неправильной формы и слабо окрашивающиеся колонии (выделены стрелками). (G–J): Окрашивание щелочной фосфатазой линии rESC DA22, культивируемой в течение 6 дней после трансфекции в среде 2i, содержащей (G) 6 мкМ или (I) 3 мкМ CH. qRT-PCR анализ rESC линии DA22, культивируемой в течение 3 дней после трансфекции в среде 2i, содержащей (H) 6 мкМ или (J) 3 мкМ CH. Сокращения: APC, аденоматозный полипоз толстой кишки; siRNA, малая интерферирующая РНК.

Рисунок 5.

Эмбриональные стволовые клетки крысы (rESC) демонстрируют более высокие уровни тонической и индуцированной активности β-катенина, чем мышиные (m) ESC. (A): Окрашивание щелочной фосфатазой двух линий rESC (DA18 и DA22), культивируемых в 3 мкМ CHIR99021, 3 мкМ BIO или 3 мкМ CHIR + 3 мкМ BIO. (B): Окрашивание щелочной фосфатазой двух линий rESC (DA18 и DA22), трансфицированных либо отрицательной (-ve) контрольной siRNA, либо siRNA к APC. (C): График, показывающий соотношение активности TOPFlash:FOPFlash rESC и mESC, культивируемых в 0, 1.5, 3, 6 или 12 мкМ CH в течение 3 дней. (D): Гистограмма, показывающая соотношение активности TOPFlash:FOPFlash линий ЭСК крыс и мышей 2i, культивируемых в 1i (только PD) на ламинине или фидерных клетках. Среднее значение и стандартное отклонение для трех биологических повторностей. (E – H): нокдаун siРНК β-катенина. Окрашивание щелочной фосфатазой (E) и количественный анализ полимеразной цепной реакции (qRT-PCR) (F) линий rESC, культивируемых в 1i в течение 6 дней при отборе на стабильную трансфекцию мутантом β-катенина (S33) или отрицательным контролем eGFP (C ) вектор.Низкое увеличение (левая панель) и высокое увеличение (средняя и правая панели, × 100) увеличение стабильно трансфицированных rESC. Остаточные трансфектанты S33 образовывали небольшие, неправильной формы и слабо окрашивающиеся колонии (выделены стрелками). (G–J): Окрашивание щелочной фосфатазой линии rESC DA22, культивируемой в течение 6 дней после трансфекции в среде 2i, содержащей (G) 6 мкМ или (I) 3 мкМ CH. qRT-PCR анализ rESC линии DA22, культивируемой в течение 3 дней после трансфекции в среде 2i, содержащей (H) 6 мкМ или (J) 3 мкМ CH. Сокращения: APC, аденоматозный полипоз толстой кишки; siRNA, малая интерферирующая РНК.

Чтобы непосредственно исследовать функциональный вклад β-катенина в rESC, мы отслеживали самообновление и экспрессию генов после сверхэкспрессии β-катенина и нокдауна siRNA. Экспрессия S33-активированной формы β-катенина [27] в условиях 1i заметно снижала образование недифференцированных колоний ЭСК, а в остаточных клетках индуцировала Cdx2 и Brachyury и подавляла экспрессию Nanog до уровней, достигаемых при ≥3 мкМ CH (рис. 5E, 5F). ; Вспомогательная информация (рис. S4K, S4L). В клетках, обработанных 6 мкМ CH, нокдаун, опосредованный β-катениновой миРНК, восстанавливал как рост недифференцированных колоний rESC, так и экспрессию маркера стволовых клеток, снижая при этом экспрессию Cdx2 и Brachyury (фиг.5Г, 5Н; Вспомогательная информация (рис. S4I, S4M, S4N). Лечение двумя различными ингибиторами β-катенина/TCF, FH535 и кверцетином, также улучшало рост колоний при высоких уровнях СН, что еще раз подтверждает, что β-катенин играет важную роль в опосредованной СН потере самообновления rESC (вспомогательная информация, рис. S4J). В среде, содержащей 3 мкМ CH (2i), аналогичное снижение β-катенина также снижало уровни Cdx2 и Brachyury , но не оказывало существенного влияния на экспрессию маркера ESC или рост колонии (рис.5И, 5Ж; Вспомогательная информация (рис. S4O, S4P). В отсутствие CH (1i) нокдаун β-катенина мало влиял на морфологию колоний или экспрессию маркеров ESC (вспомогательная информация, рис. S4Q-S4T). Обработка антагонистом Wnt Dkk1 блокировала экзогенную индукцию Wnt репортера люциферазы Topflash, но не смогла дополнительно подавить активность Topflash в культурах 1i rESC, подразумевая, что базальная передача сигналов Wnt в rESC находится на низких уровнях в кокультурах фидеров (подтверждающая информация, рис. S4H) . Эти эксперименты предполагают, что ESC крысы сенсибилизированы к передаче сигналов, опосредованной β-catenin, и что чрезмерная активность этого пути с помощью CH дестабилизирует самообновление.

Чтобы оценить потребность rESC в ингибировании GSK3 в отсутствие фидеров, мы высевали rESC на ламинин и наблюдали за их реакцией на CH. Мы использовали ламинин, потому что он обеспечивает надежное прикрепление ESCs, поддерживает кратковременное самообновление rESC [1] и способствует незначительной транскрипционной активности β-catenin в отсутствие CH (Fig. 5D). В отличие от ситуации на фидерах экспрессия маркеров стволовых клеток была резко снижена как в рЭСК, так и в мЭСК, высеянных на ламинин без ЦГ, и сопровождалась плохим ростом клеток и морфологической дифференцировкой (рис.6А; Вспомогательная информация (рис. S5A). Увеличение дозы CH с 0,37 до 3 мкМ приводило к постепенному восстановлению экспрессии и роста маркера ESC как для rESC, так и для mESC (рис. 6B; вспомогательная информация, рис. S5B). Однако при концентрации CH выше 3 мкМ реакция ЭСК отличалась. рЭСК показали резкое снижение экспрессии маркеров ЭСК, нарушение роста и признаки дифференцировки. Сходный ответ наблюдался с культурами rESC, дважды предварительно пассированными на ламинине, чтобы устранить остаточное кондиционирование, связанное с фидерами, перед постановкой эксперимента, подтверждая, что дифференцировка, индуцированная CH, была свойственна rESC (вспомогательная информация, рис.S5C, S5D). Интересно, что кондиционированная фидерная среда увеличивала рост колоний rESC на ламинине в присутствии 2i, подтверждая мнение о том, что фидеры могут обеспечивать независимую от GSK3/β-катенина поддержку роста rESC (вспомогательная информация, рис. S5E). В отличие от rESC, mESC, высеянные на ламинин, образовывали все более компактные колонии при более высоких дозах CH и не вызывали значительного снижения экспрессии маркера ESC (рис. 6A, 6B; вспомогательная информация, рис. S5A, S5B). Эти результаты показывают, что умеренные уровни ингибирования GSK3 способствуют самообновлению rESC по схеме, в целом сходной с таковой для ESC мыши, но более высокие концентрации CH индуцируют дифференцировку, как это наблюдается в сокультурах с фидером.В совокупности результаты этих культур без фидеров предполагают, что более высокий тонический уровень активности β-catenin в rESCs требует, чтобы активность GSK3 была более тонко настроена, чтобы ограничивать дифференцировку и эффективно способствовать самообновлению и поддержанию плюрипотентности.

Рисунок 6.

Настройка Ингибирование GSK3 необходимо для поддержки роста эмбриональных стволовых клеток крысы (rESC) на ламинине. (A): Яркопольные изображения линии rESC DA22 (верхние панели) и мыши (m) линии ESC m1.1 (нижние панели) культивировали на ламинине в 0 мкМ, 3 мкМ или 6 мкМ CH в течение 3 дней (увеличение × 100). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой тех же линий rESC (верхняя панель) и mESC (нижняя панель), что и на панели (A), культивированных на ламинине в различных концентрациях CH в течение 3 дней. Уровни экспрессии нормализованы по сравнению с таковыми в 1i (0 мкМ CH).

Рисунок 6.

Настройка Ингибирование GSK3 необходимо для поддержки роста эмбриональных стволовых клеток крысы (rESC) на ламинине. (A): Изображения в светлом поле ЭСК линии DA22 (верхние панели) и линии ЭСК мыши (m) m1.1 (нижние панели), культивированных на ламинине в 0 мкМ, 3 мкМ или 6 мкМ CH в течение 3 дней ( увеличение ×100). (B): Количественный анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой тех же линий rESC (верхняя панель) и mESC (нижняя панель), что и на панели (A), культивированных на ламинине в различных концентрациях CH в течение 3 дней. Уровни экспрессии нормализованы по сравнению с таковыми в 1i (0 мкМ CH).

Обсуждение

Изучение того, как сигнальные пути регулируют мЭСК, привело к предположению, что аутентичные наивные ЭСК обладают внутренней способностью к самообновлению, когда они соответствующим образом экранированы от продифференцирующих сигналов [6, 17].Важным компонентом этого щита является подавление аутокринной передачи сигналов FGF/ERK посредством ингибирования MEK [6, 12, 13]. Более поздние сообщения, однако, ясно показывают, что одного этого барьера недостаточно, и что мЭСК требуют дополнительных активных входов от сигнальных путей Wnt/β-катенин или LIF/STAT3 для поддержки долгосрочного самообновления [18, 19, 21, 32]. Наше исследование потребности в ингибиторах MEK и GSK в культурах rESC показало, что на фидерах ингибирование только MEK (условия 1i) позволяет эффективно получать и размножать культуры rESC.Важно отметить, что rESC 1i вносят вклад в химерных животных с эффективностью, сравнимой с клеточными линиями 2i, и передавались через зародышевую линию, демонстрируя, что эти культуры 1i представляют собой аутентичные наивные ESC. Эти находки также привлекли наше внимание к новым аспектам передачи сигналов самообновления в ESCs, в частности, к дозозависимому ответу на ингибирование GSK3 и к тому, как он отличается между наивными ESC, полученными от крысы и мыши. Ключевым фактором, лежащим в основе этих различий, были более высокие уровни транскрипционной активности, опосредованной β-catenin, наблюдаемые в rESCs.В то время как индукция активности β-катенина выше базального уровня первоначально способствовала самообновлению ЭСК обоих видов, дальнейшая стимуляция вызывала дифференцировку клеток крыс, но не мЭСК. Это показывает, что активность β-катенина играет ключевую роль в модулировании баланса между самообновлением и дифференцировкой в ​​rESC, и повышает общую вероятность того, что настройка уровня активности в этом сигнальном пути может быть важным элементом в стабилизации плюрипотентных клеток наивного типа. Состояние ЭСК у видов, отличных от мышей.

Наше исследование эффектов CH на ESC показало, что обычно rESC демонстрируют значительно более высокие уровни передачи сигналов β-catenin, чем mESC. Это было поразительно очевидно из заметной повышенной регуляции маркеров дифференцировки Brachyury и Cdx2 в культурах 2i rESC. Brachyury , ключевой регулятор развития мезодермы во время гаструляции и прямая мишень β-катенина, обычно экспрессируется на очень низких уровнях в наивных мЭСК, но может индуцироваться в эпиСК праймированного типа и, следовательно, представляет собой полезный индикатор ранней стадии дифференцировка мЭСК [32, 38].Экспрессия Cdx2 , напротив, до недавнего времени часто упоминалась в качестве определяющего маркера трофобласта в дифференцированных ЭСК, но экспрессия в примитивной полосе и индукция с помощью Brachyury и FGF в ЭСК человека выявили связь этого транскрипционного фактора с дифференцировкой мезодермы. 39]. Учитывая, что rESC, поддерживаемые в 2i, явно плюрипотентны, экспрессия ядерного белка Brachyury и Cdx2 в rESCs явно допустима и, по-видимому, не ставит под угрозу самообновление в этих конкретных условиях.Однако более высокие концентрации CH, при которых уровень мРНК Brachyury и Cdx2 увеличивался более чем в 10 раз, вызывали подавление маркеров стволовых клеток и дифференцировку rESC. Этот ответ напоминает недавний отчет, описывающий, как передача сигналов Wnt и ингибиторы GSK3 индуцируют мезодермальную дифференцировку в ЭСК человека [40], и указывает на возможность того, что β-катенин играет разные роли в rЭСК в зависимости от уровня его активности. В этом контексте следует отметить, что исследования mESCs предполагают, что белок β-catenin нацелен на факторы TCF, вносит определенный вклад в регуляцию ESCs [19].Это иллюстрируется противоположной активностью TCF3 и TCF1, соответственно, репрессирующих и активирующих общие репортерные конструкции TCF в ESCs [18, 19]. Возможно, в основе зависимого от β-катенина переключения между самообновлением и дифференцировкой в ​​rESCs лежат различные видоспецифичные паттерны вовлечения TCF, определяемые их обилием и различными уровнями активности β-catenin [41, 42].

Более низкие уровни β-catenin-зависимой активности, наблюдаемые в mESC, либо в ответ на совместное культивирование с фидерами, либо в результате химического ингибирования GSK3, указывают на то, что поток в рамках этого пути в mESCs ограничен по сравнению с rESC.Это ограничение, которое, согласно имеющимся данным, находится ниже по течению от GSK3, может быть ответственным за относительную нечувствительность mESC к фидер-зависимой активации пути, а также согласуется с недавним сообщением о том, что совместное культивирование с MEF не способно поддерживать устойчивый рост mESC в сыворотке. в свободных условиях даже в присутствии ингибитора МЕК [21]. Ограниченный поток в пути Wnt/β-catenin может также объяснить устойчивость mESC к продифференцирующим эффектам высоких уровней CH, которые наблюдаются в rESC.Действительно, хотя культуры mESC, подвергшиеся воздействию более высоких концентраций CH, экспрессировали Brachyury и Cdx2 , экспрессия маркеров стволовых клеток и типичная морфология колоний ESC наивного типа сохранялись. Уменьшение размера колоний mESC, которое мы наблюдали при высоких концентрациях CH, также было отмечено ранее другими исследователями, использующими ряд химически отличающихся ингибиторов GSK3, включая некоторые из них с большей эффективностью, чем CH [18]. Это подразумевает, что даже когда ингибирование GSK3 почти полное, mESCs относительно устойчивы к дифференцировке: вывод подтверждается продолжающейся супрессией маркера примитивной эктодермы/EpiSC Fgf5 в этих культурах.В то время как ограниченный динамический диапазон активности β-катенина в мЭСК может диктовать уровень ингибирования GSK3, совместимый с самообновлением, он также может обеспечивать устойчивость к флуктуациям других взаимодействующих регуляторных сигналов или условий роста, которые в противном случае вывели бы ЭСК за пределы ограниченного диапазона. регуляторная сеть стволовых клеток.

Заключение

Наш анализ rESCs позволяет понять, как передача сигналов GSK3/β-catenin может влиять на самообновление ESC наивного типа у видов, отличных от мышей.Эти находки предполагают, что уровень передачи сигналов β-catenin играет важную роль в контроле самообновления ESC. Стабильность mESCs в установленных условиях культивирования, возможно, до сих пор маскировала более общее рассмотрение того, как поток внутри сигнальных путей контролирует самообновление ESC. Этот вопрос особенно актуален, когда устойчивость к дифференцировке ESC зависит от непрерывного активного ввода внешних сигналов самообновления, например, Wnt/β-catenin или LIF/STAT3 [41]. Действительно, сравнение ответов рЭСК и мЭСК показывает, что, хотя может быть относительно просто нейтрализовать продифференцирующую активность ERK, может быть более сложно достичь соответствующего уровня ингибирования GSK3, или, более конкретно, активности β-катенина, в разных клетках. контексты.Эта концепция может применяться более широко к другим сигналам самообновления и объясняет значительные трудности в выделении и размножении немодифицированных наивных ЭСК от других млекопитающих [43]. Наконец, неожиданный вывод о том, что ESC крыс самообновляются более эффективно в условиях 1i, чем архетипические ESC, полученные от мышей, подчеркивает ценность межвидовых исследований для построения надежных общих моделей того, как сигналы контролируют основную регуляторную сеть наивных плюрипотентных ESC.

Благодарности

Мы благодарим членов отдела трансгенных животных Института исследований стволовых клеток и ресурсов биомедицинских исследований Эдинбургского университета за их поддержку; Tilo Kunath, Denis Headon, Ian Chambers и Helen Sang за комментарии к рукописи; Майклу Клинтону за его экспертный редакционный вклад; Бобу Флемингу за помощь в цейтраферной микроскопии; Hans Clevers и Marc van de Wetering за предоставление векторов экспрессии β-катенина; Peter Hohenstein, Karamjit Singh-Dolt, Katherine Norrby и Melany Jackson за помощь в клонировании Gateway; Остину Смиту и Кэтрин Блэр за обсуждение данных и предоставление линии DAK31 rESC.Эта работа была поддержана за счет средств Исследовательского совета по биотехнологии и биологическим наукам, Фонда Рослина и Седьмой рамочной программы Европейского сообщества (FP7/2007–2013) в рамках соглашения о гранте № HEALTH-F4-2010-241504 (EURATRANS).

Раскрытие потенциальных конфликтов интересов

Авторы указывают на отсутствие потенциального конфликта интересов.

Каталожные номера

1

Buehr

 

M

,

Meek

 

S

,

Blair

 

K

 et al..

Получение аутентичных эмбриональных стволовых клеток из бластоцисты крысы

.

Ячейка

 

2008

;

135

:

1287

1298

.2

LI

P

,

TONG

C

,

Mehrian-Shai

R

et al. .

Компетентные эмбриональные стволовые клетки зародышевой линии, полученные из бластоцист крысы

.

Ячейка

 

2008

;

135

:

1299

1310

.3

Tong

 

C

,

Li

 

P

,

Wu

 

NL

 et al. .

Получение крыс с нокаутом гена р53 путем гомологичной рекомбинации в эмбриональных стволовых клетках

.

Природа

 

2010

;

467

:

211

211

213

.4

213

.4

Yamamoto

S

,

Nakata

M

,

Sasada

R

et al. .

Получение эмбриональных стволовых клеток крысы и создание нокаутных крыс по рецептору-2, активируемому протеазой

.

Transgenic Res

 

2012

;

21

:

743

743

755

.5

Kobayashi

T

,

Kato-ITOH

M

,

Yamaguchi

T

et al. .

Идентификация крысиного локуса Rosa26 позволяет получить нокаутированные линии крыс, повсеместно экспрессирующие tdTomato

.

Стволовые клетки Дев

 

2012

;

21

:

21

:

2981

2986

. 6

Йинс

QL

,

Wray

J

,

Nichols

J

et al..

Основное состояние самообновления эмбриональных стволовых клеток

.

Природа

 

2008

;

453

:

519

523

.7

Nichols

J

,

Jones

K

,

Phillips

JM

et al. .

Утвержденные компетентные к зародышевой линии линии эмбриональных стволовых клеток мышей без ожирения и диабета

.

Nat Med

 

2009

;

15

:

814

818

.8

Ханна

 

J

,

Ченг

 

AW

,

Саха

 

K

 и др. .

Эмбриональные стволовые клетки человека с биологическими и эпигенетическими характеристиками, сходными с характеристиками ЭСК мыши

.

Proc Natl Acad Sci USA

 

2010

;

107

:

9222

9227

9227

.9

Wang

W

,

Yang

J

,

LIU

H

et al..

Быстрое и эффективное перепрограммирование соматических клеток в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки с помощью гамма-рецептора ретиноевой кислоты и гомолога рецептора печени 1

.

Proc Natl Acad Sci USA

 

2011

;

108

:

18283

18288

.10

Чэн

утра

,

Saxton

TM

,

Sakai

R

et al. .

Grb2 млекопитающих регулирует несколько стадий эмбрионального развития и злокачественную трансформацию

.

Ячейка

 

1998

; .

Shp-2 играет положительную регулирующую роль в дифференцировке и пролиферации ES клеток

.

Онкоген

 

1998

;

17

:

433

439

439

.12

Burdon

T

,

STRACEY

C

,

Chambers

I

et al..

Подавление передачи сигналов SHP-2 и ERK способствует самообновлению эмбриональных стволовых клеток мыши

.

Дев Биол

 

1999

;

210

:

30

:

30

43

.13

Kunath

T

,

Saba-El-Leil

MK

,

Almousailleakh

M

et al. .

Стимуляция FGF сигнального каскада Erk1/2 запускает переход плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток от самообновления к детерминации клона

.

Разработка

 

2007

;

134

:

2895

2902

.14

Sato

N

,

Meijer

L

,

Skaltsounis

L

et al. .

Поддержание плюрипотентности в эмбриональных стволовых клетках человека и мыши посредством активации передачи сигналов Wnt фармакологическим GSK-3-специфическим ингибитором

.

Nat Med

 

2004

;

10

:

55

63

.15. .

Определение роли передачи сигналов Wnt/бета-катенина в выживании, пролиферации и самообновлении эмбриональных стволовых клеток человека

.

Стволовые клетки

 

2005

;

23

:

1489

1501

.16

Ogawa

K

,

Nishinakamura

R

,

Iwamatsu

y

et al..

Синергическое действие Wnt и LIF в поддержании плюрипотентности мышиных ES клеток

.

Biochem Biophysi Res Commun

 

2006

;

343

:

159

166

.17

Сильва

 

J

,

Смит

 

A

.

Захват плюрипотентности

.

Ячейка

 

2008

;

132

:

532

:

532

536

.18

Dray

J

,

Kalkan

T

,

Gomez-Lopez

S

et al..

Ингибирование киназы-3 гликогенсинтазы облегчает репрессию Tcf3 сети плюрипотентности и повышает устойчивость эмбриональных стволовых клеток к дифференцировке

.

Nat Cell Biol

 

2011

;

13

:

838

845

.19

.19

Yi

F ​​

,

Pereira

L

,

Hoffman

JA

et al. .

Противоположные эффекты контроля Tcf3 и Tcf1 Стимуляция Wnt самообновления эмбриональных стволовых клеток

.

Nat Cell Biol

 

2011

;

13

:

762

770

770

.20

Lyashenko

N

,

Winter

M

,

Migliorini

D

et al. .

Дифференциальная потребность в двойных функциях бета-катенина при самообновлении эмбриональных стволовых клеток и формировании зародышевого листка

.

Nat Cell Biol

 

2011

;

13

:

753

761

761

.21

Ten Berge

D

,

KUREK

D

,

BLAUWKAMP

T

et al..

Эмбриональным стволовым клеткам требуются белки Wnt для предотвращения дифференцировки в стволовые клетки эпибласта

.

Nat Cell Biol

 

2011

;

13

:

1070

1070

1075

.22

Tighe

A

,

Ray-Sinha

A

,

Стыки

OD

et al. .

Ингибиторы GSK-3 вызывают нестабильность хромосом

.

BMC Cell Biol

 

2007

;

8

:

34

.23

Асеведо

 

N

,

Ван

 

X

,

Данн

 

RL

 и др. .

Киназа-3 гликогенсинтазы регуляция сегрегации хроматина и цитокинеза у преимплантационных эмбрионов мыши

.

Мол Репрод Дев

 

2007

;

74

:

178

:

178

188

.24

Korinek

V

,

Barker

N

,

MORIN

PJ

et al..

Конститутивная активация транскрипции комплексом бета-катенин-Tcf при карциноме толстой кишки APC-/-

.

Наука

 

1997

;

275

:

1784

1787

.25

.25

Hong

J

,

He

H

,

Weiss

мл

.

Получение и характеристика линий эмбриональных стволовых клеток, полученных от трансгенных крыс Fischer 344 и темных крыс Agouti

.

Стволовые клетки Дев

 

2012

;

21

:

1571

1586

.26

Мик

 

S

,

Бюр

 

M

,

Сазерленд

 

L

 и др. .

Эффективное нацеливание генов путем гомологичной рекомбинации в эмбриональных стволовых клетках крыс

.

Плос Один

 

2010

;

5

:

E14225

.27

.27

VAN

SLORT

M

,

VAN DE

Усилование

M

,

Clevers

H

.

Идентификация двух новых регулируемых серинов на N-конце бета-катенина

.

Exp Cell Res

 

2002

;

276

:

276

:

264

272

.28

Irizarry

RA

,

BOLSTAD

BM

,

Collin

F ​​

et al. .

Сводка данных уровня зонда Affymetrix GeneChip

.

Рез. нуклеиновых кислот

 

2003

;

31

:

e15

.29

Хей

DC

,

Сазерленд

L

,

Кларк

J

и др.

.

Нокдаун Oct-4 индуцирует сходные паттерны маркеров дифференцировки энтодермы и трофобласта в эмбриональных стволовых клетках человека и мыши

.

Стволовые клетки

 

2004

;

22

:

225

235

.30

Ямамура

 

K

,

Маркерт

 

CL

.

Получение химерных крыс и их использование для анализа пигментации капюшона

.

Дев Жене

 

1981

;

2

:

131

146

.31. .

Параметры культуры для стабильного размножения, генетической модификации и передачи по зародышевой линии плюрипотентных стволовых клеток крысы

.

Biol Open

 

2012

;

1

:

58

58

65

.32

Kelly

KF

,

NG

DY

,

Jayakumaran

G

et al..

Бета-катенин усиливает активность Oct-4 и усиливает плюрипотентность посредством TCF-независимого механизма

.

Стволовая клетка

 

2011

;

8

:

214

227

.33

Николс

 

Дж

,

Смит

 

А

.

Наивные и праймированные плюрипотентные состояния

.

Стволовая клетка

 

2009

;

4

:

4

:

487

492

.34

Kibardin

A

,

Ossipova

O

,

Sokol

SY

.

Ассоциированная с метастазами киназа модулирует передачу сигналов Wnt, чтобы регулировать формирование мозгового паттерна и морфогенез

.

Разработка

 

2006

;

133

:

2845

2854

.35

.35

Chawengsaksophak

K

,

De Graaff

W

,

ROSSANT

J

et al. .

Cdx2 необходим для осевого удлинения в развитии мышей

.

Proc Natl Acad Sci USA

 

2004

;

101

:

7641

7645

.36

Showell

C

,

Binder

O

,

Conlon

FL

.

Гены T-box в раннем эмбриогенезе

.

Дев Дин

 

2004

;

229

:

201

201

218

.37

Buehr

M

,

Nichols

J

,

Stenhouse

F ​​

et al. .

Быстрая потеря Oct-4 и плюрипотентность в культивируемых бластоцистах грызунов и производных клеточных линиях

.

Биол Репрод

 

2003

;

68

:

222

222

229

.38

Bernemann

C

,

Greber

B

,

KO

K

et al. .

Отличительные основные состояния развития линий стволовых клеток эпибласта определяют различные признаки плюрипотентности

.

Стволовые клетки

 

2011

;

29

:

1496

1503

.39

Bernardo

AS

,

Faial

T

,

Gardner

L

et al..

BRACHYURY и CDX2 опосредуют BMP-индуцированную дифференцировку плюрипотентных стволовых клеток человека и мыши в эмбриональные и внеэмбриональные линии

.

Стволовая клетка

 

2011

;

9

:

144

144

155

.40

Davidson

KC

,

ADAMS

ADAMS

ADAM

,

TOODOSON

JM

et al. .

Передача сигналов Wnt/beta-catenin способствует дифференцировке, а не самообновлению эмбриональных стволовых клеток человека и репрессируется Oct4

.

Proc Natl Acad Sci USA

 

2012

;

109

:

4485

4490

.41

Нива

 

Н

.

Wnt: Что нужно для поддержания плюрипотентности?

 

Nat Cell Biol

 

2011

;

13

:

1024

1026

.42

Сокол

 

СЯ

.

Поддержание плюрипотентности эмбриональных стволовых клеток с помощью передачи сигналов Wnt

.

Разработка

 

2011

;

138

:

4341

4350

.43

Блэр

 

К

,

Рэй

 

J

,

Смит

 

А

.

Высвобождение эмбриональных стволовых клеток

.

Генетика PLoS.

 

2011

;

7

:

e1002019

.

Примечания автора

© AlphaMed Press

Эта статья публикуется и распространяется на условиях Стандартной модели публикации журналов Oxford University Press (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

Tuning 2104 — gyakorlati ajánlások, valamint video példák

Тюнинг ahogy mindannyian tudjuk — talán a legnépszerűbb módja, hogy kifejezzék egyéniségüket az auto. Amikor EZ Változás Van Kitéve Nemcsak Drága autók, Hanem a Termékebet a autóipar hazai, amelyek közül az egyik 2104.

Természetesen Minél Gyakrabban, Modell, és ez nem más, Mint a módosított a kocsi, ВАЗ 2105, használják a tulajdonosok puszta közlekedési eszköz leltár hazból, hogy a haz és vissza.Ez nem meglepő, hiszen 2104 mert csak teremtett, igazolt és tágas csomagtér, és megerősített hatsó felfüggesztés és vontatasi tengely. Azonban nem minden gépkocsi-tulajdonosok a modell elő, hogy beletörődik a «szerény» Tekintettel az auto. Gyakran töltenek рестайлинг és felülvizsgálata lényegesen TOBB pénzt, чеканить vásárlás Gép Мага érdekli kérdés, hogyan Lehet тюнинг ВАЗ 2104, Igy Тобби tulajdonosok hazai autók akarta, hogy átalakítsa választ Келл ADNI, hogy аз, hogy Senki семафор tudja, Мерт Minden тюнинг autók külön-külön a maguk számára.Бар ez logikus következtetés, hogy ha az autóban lesz elégedett mindennel 100 százalékos, majd a többi munka, autósok észre és értékeljük.

Ma beszéljünk némi javulás 2104 tulajdonosai gyakran végeznek belül és kívül egyaránt.

Тюнинг зервезетбена.

Mi teszi az autot jobban észrehehető forgalmat? Természetesen a szokatlan megjelenése. Ez nem meglepő, hogy az első dolog, amit a tulajdonosok 2104 elvégezte a restyling a külső a gép. Ми Эз?

Leggyakrabban megváltoztatja az alakját a test, ez történik a különféle specialis burkolatok.Ahhoz, hogy a szükséges adatokat ebben ma már nem szükséges, hogy kezébe daralók, hegesztőgép és levágta felét az auto, az autógyártók már vigyáztak mindenre. Tehát „tyuningatora”, nevezzük ugy, hogy csak akkor van szükség, hogy menjen az auto, és vásárlás a tételeket, hogy ő leginkább, mint a megjelenés. Az utóbbi lehet fémből, szénszálas, műanyag és üvegszálas. Anyag, valamint a nagyon részletes választ, hogy a preference, biztonsági okokból, pénztárca és egyéb fedételeknek és követelményeknek.

Például festetlen küszöbök (2 db.) Az üveg 2104 a Boltban «Tuning Sport» противотуманки kerülni tizenötezer rubelt (több tuningsport.ru).

teljessé listát a külső modosítások — аэрограф, ami csak arra szolgál, a legjobb alkalom lehet különbséget tenni autoikat között az unalmas szürke tömeg hazai autoiparban. Скала мунка сок, természetesen függ a képességeit a pénztárca és kívánságait. Nos, az egyik olyan hely, ahol menni ebben a kérdésben «Студия аэрографии Федоренко Максима» (горизонт-студия.ру).

Belső тюнинг.

2104 Тюнинг tekintetében аз utastérben ugy tervezték, hogy hozzon letre maximális kényelem a vezető és az utasok számára.

Az első lépés a gép meg lehet változtatni a bőr szén, baromfiállomány és természetesen a bőr. Ezt meg lehet tenni mind a hazai és a kezében egy mester, például avtoatele «Лидер-авто». Fog kerülni, természetesen, több mint ezer rubel, de hidd el, megéri. Полная информация: www.leader-car.ru.

Azt javaslom elolvasni:


Капсолодо чиккек

Koberce kusové, autokoberce na míru, autopotahy, dětské koberce

Зволте барву Бежова Белая Черная Червень Фиалова Гнеда Кремова Микс Модр Оранжова Ружова Шед Тыркесов Винова Зелена Жлута

Взор 3D, пластик, абстрактные твари, детские геометрические, тварные, однобарьерные, цветные, современные, восточные, нитрадиционные

Материал AkrylBavlnaShaggyUmělé vláknoViskózaVlna

Вышка влас низкий

Тржида премиовистандарт

Зобразит коберце

2104-й Lada esete и Nissan Silvia блок

Van akinél a Lada tuningja kimerül a vágott rugókban és a forgatott felnikben és nem is vágynak többre.Megint mások már belenéznek motortérbe is, és mondjuk megturbózzák a a jól bevált ezerötöst.

На Эс Отт ван Серхио.

A görög úriember hihetetlenül népszerű az Internet berkein belül, mindez főként tavalyi video után indult be, amin csúnyán elkeni az autopályán az autopályán egy Porsche 911 GT2 száját. Hősünk ekkor egyébként éppen az aktuális Unlim500+ versenyre sietett nem mindennapi Kombijával, abban a mezőnyben pedig nem sok gép van, ami labon érkezik helyszínre.

A jól ismert, kívülről totálisan jelentéktelen fehér 2104-es kombi története még 2008-ban kezdődött, jelenlegi állapotaba pedig cirka 4 ev munkájával került. Jogos kérdés, hogy egyáltalán lehet-e még Ladának nevezni — tulajdonosa is jobban szereti, ha inkább a Nissan márkával illetik — hiszen a kasztnit leszámítva már szinte semmi sem eredeti a gépen.

Sergio ugyanis nem csak motort cserélt az autoban, hanem sokkal inkább egy Nissan Silviát épitett, Lada bódéval.Sőt, állítása szerint meg jobbat is, hiszen habár a kocka aerodinamikája nincs toppon, a súlyelosztása jelen állapotban pont 50/50-es.

Az első lépést az alváz komplett átalakítása jelentette, hogy helyet adjon az uj erőforrásnak és a hozzá tartozó hajtásnak. Nissan kétliteres, 16-szelepes, piros-szelepfedeles SR20DET került a motorháztető alá, tengelykapcsolás terén pedig az S14-ből származó ötsebességes manuális egység váltotta a gyari darabot. Ez utóbbi a Nismo Coopermix kuplungja kíséretében került beepitésre, diffi egy S13-asból származik, a kardant pedig egyedileg gyártatták a meglévő rendszerhez.

Кюлон mutatvany volt a futómű acceptálása, ami az első tengelyen S13, hatul pedig az S14-esből származik. Ezek beszereléséhez eleg rendesen át kellett szabni az 1991-es alváz adottságait: teljesen újra kellett építeni például a hátsó tornyokat, amit Sergio a Silvia eredeti tervrajza alapján, saját kezu mevalístovaltt fémmunkávaltt. Lengéscsillapítók terén HKS Hipermax szettjét újította be, a fékek helyét pedig az S13-as Silvia gyari alkatrészei vették át.

Az auto alá pakolt 15×7.0 Colos Könnyűfém Felnigarnitúra Pont Annyira Jelentéktelen, Hogy Senki Ne Fogjon Gyanút Az Epítés Splet Mivoltárol, Habár Sasszemű Lada-Fanok Lehet, Hogy Rögtön Kiszúrják A Gyritól Minimálisan Eltérő 4×114.3 — As Körosztót. Abroncsok terén и TOYO R888-asai kerültek fel, 195/50/15-ös meretben.

Ha pedig mindez nem lenne elég, a motor meg szépen fel is lett húzva a gyári 202 lóerőről. A tartalékokkal bőven rendelkező Silvia blokk tudását viszonylag kis beavatkozásokkal 400 lóerőig izmosítottak, mely 4.2 гонки на 100 км/спринт, 240 км/мин вегебессегре эл. Lehet, hogy menne többel is, de e felett már erősen megmutatkoznak a szögletes kasztni hatrányai.

Az utastér a külsőhöz hasonlatosan teljesen gyári állapotban maradt, egyedül a Nismo sportkormany és váltógomb, valamint a motor visszajelzőórái árulják el.

Hasonló építést egyébként láthattunk MAR аз oroszoktól есть, Ott EGY 2105-ösbe került горизонт motorja, vagy га maradunk görögöknél, természetesen нэм maradhat ки hazánkban является Самош alkalommal driftelő Xenikos Nassos, akinek szintén аз S13-а szíve hajtja versenyautóját.

Форрас: Youtube

х

Jelenleg ezt olvasod: 2104-es Lada esete a Nissan Silvia blokkal
Elmondanád véleményed? Szólj hozzá te is!

Подразделение — Сиднейский университет

Единица исследования_

Этот модуль обучения представляет собой введение в основы работы и конструкции подсистем передатчика и приемника для двух широких классов систем связи: систем, основанных на электронной передаче, и тех, которые основаны на оптической передаче.В области подсистем электронной связи курс представляет конструкцию передатчика и приемника. Темы, относящиеся к передатчику, включают источники электронных генераторов, настроенные электронные усилители и модуляторы. Темы, относящиеся к конструкции приемника, включают частотно-селективные усилители ВЧ и ПЧ, смесители, демодуляторы, контуры фазовой автоподстройки частоты, усилители с обратной связью и усилители ВЧ и СВЧ связи. В области подсистем оптической связи курс представляет фотонные передатчики и приемники.Со стороны передатчика основное внимание уделяется принципам генерации света в оптических источниках, таких как полупроводниковые лазеры и светоизлучающие диоды, электрооптической модуляции света и оптических усилителях. Со стороны приемника обсуждаются фотодетекторы, оптические приемники и входные схемы. Рассмотрены принципы и конструкция этих подсистем применительно к базовой оптоэлектронной линии связи.

клеточная линия . Секс . Проход . Передано . Родился . Химеры . Секс . ГЛТ .
DA27 (1i) F 633 186 (29%) 25 (13%) 25 (13%) 11F A 2/10
DA38 (1i) F 7, 11 7, 11 25 (68%) 17 (12%) 2 (12%) 1F 0/1 C
Dak31 (2i + LiF) M 18-209 178-20 178 62 (35%) 21 (35%) 21 (34%) 21 (34%) 21 (34%) 10 м 4/10
Код ЭЛЕКТР3405
Учебная единица Электротехника и информационная инженерия
Кредитные баллы 6
Предпосылки:

?

Нет
Сопутствующие товары:

?

Нет
Запреты:

?

Нет
Предполагаемые знания:

?

ЭЛЕКТРО2104.Предполагается наличие базовых знаний в области электроники и теории цепей.

По завершении этого модуля вы сможете:

  • LO1 . проводить исследования и развивать знания, используя различные источники и форматы средств массовой информации, чтобы синтезировать и дополнять информацию, относящуюся к представленной курсовой работе
  • LO2 .делать письменные презентации в виде лабораторных и проектных отчетов
  • ЛО3 . работать в команде и поддерживать процесс творческого командного взаимодействия для проектирования законченной системы электронной связи, принимая на себя различные роли, будучи открытым для альтернативных точек зрения и творчески внося свой вклад в достижение результата в срок и в пределах объема
  • LO4 .спроектировать, внедрить и протестировать полную систему электронной связи, которая может передавать информацию, используя технические принципы и методологию проектирования, представленные в курсе
  • LO5 . наглядное понимание источников генераторов, настроенных усилителей и модуляторов, включая частотно-селективные усилители ВЧ и ПЧ, смесители, демодуляторы и усилители с обратной связью
  • LO6 .продемонстрировать понимание генерации света в оптических источниках, таких как полупроводниковые лазеры и светоизлучающие диоды, модуляция света, фотодетекторы и схемы оптических приемников
  • LO7 . применить принципы коммуникационной электроники и фотоники к базовой оптоэлектронной линии связи в рамках конкретной задачи инженерного проектирования
  • LO8 .продемонстрировать понимание фундаментальных принципов и концепций передатчиков и приемников электронной связи в объеме материала, представленного в курсе
  • LO9 . описывать принципы работы передатчиков и приемников оптической связи в пределах материала, представленного на протяжении всего курса.

Габаритные размеры блока

Схемы модулей будут доступны за 2 недели до первого дня обучения соответствующей сессии.

  • 2 семестр 2022 г. [Обычный день] — Кэмпердаун
  • Семестр 2, 2022 [Обычный день] — Удаленный
  • Ключевые даты

    Ключевые даты в течение учебного года, включая периоды обучения, перепись, сроки оплаты и экзамены.

  • Администрация студентов

    Зачисление, планирование курса, оплата, выпуск, услуги поддержки, ИТ для студентов Процесс подачи академических апелляций, особое рассмотрение, правила и рекомендации, советы и поддержка

  • Политика обучения и преподавания

    Реестр политик, поиск политик

  • Финансовая поддержка

    Стипендии, беспроцентные кредиты, стипендии, управление финансами

  • Учебные ресурсы

    Обучение Центр, факультетские и школьные программы, библиотека, онлайн-ресурсы

  • Здоровье и поддержка

    Студенческий центр, консультационные и психологические услуги, университетская служба здравоохранения, общее состояние здоровья и благополучия

Поиск устройства
Название единицы поиска, код единицы или ключевые слова

.

Comments |0|

Legend *) Required fields are marked
**) You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>
Category: Тюнинг