АВТО БЛОГ YAMAHA-VOLGA.RU

Количество:

Добавление в корзину… Товар добавлен

Магазины ProMag производятся в США и имеют пожизненную гарантию от заводских дефектов. Магазинные пружины намотаны с высокой точностью с использованием термообработанной хромо-кремниевой проволоки, и каждый шаг процесса сборки проверяется и проверяется дважды, чтобы поддерживать тот же постоянный уровень качества.

Особенности :

• 50 — Круглая емкость
• Термически обработанная хромо-кремниевая проволочная пружина
• Произведено и собрано в США
• Прочная конструкция 4

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Магазин ProMag Drum, 9 мм, 50 патронов, подходит для Glock 43, полимер, черный DRM-A14

  $104,97

  Промаг

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Магазин ProMag Drum, 40 S&W, 50 патронов, подходит для Glock 22/23/27, полимер, черный DRM-A19

  $95,46

  Промаг

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Магазин ProMag Drum, 9 мм, 50 патронов, подходит для Glock 43X/48, полимер, черный DRM-A20

  $95,46

  Промаг

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Магазин ProMag Drum, 380 ACP, 32 патрона, подходит для Glock 42, полимер, черный DRM-A38

  $95,46

  Промаг

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Магазин ProMag, 10 мм, круглый барабан 50, подходит для Glock 20, полимер, черный DRM-A69

  102,50 доллара США

  Промаг

• Быстрый просмотр В корзину

  Магазин ProMag, 9 мм, 32 патрона, подходит для Glock 17/19/26, полимер, черный GLK-A8B

  28,18 долларов США

  Промаг

• Быстрый просмотр Добавить в корзину

  Журнал ProMag Drum, 9мм, 50 патронов, подходит для Glock 43, полимер, черный DRM-A14

  $104,97

  Промаг

• Быстрый просмотр Параметры просмотра

Влияет ли липидный состав DRM на структуры адгезии клеток и внеклеточного матрикса?

Cell Adh Migr. июль-сентябрь 2008 г.; 2(3): 180–183.

doi: 10.4161/cam.2.3.6604

^{1, 2} и ^{2, 9015 Автор8 3}

Очаговые спайки между клетками и внеклеточным матриксом адгезия. Они встроены в устойчивые к детергентам мембранные микродомены, обогащенные фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфатом. Несмотря на значимость мембранных липидов для структур клеточной адгезии, насколько нам известно, ранее не было сообщений о составе мембранных липидов там, где локализуются фокальные адгезии in vivo, или о том, как изменения в локальном составе мембран способствуют поддержанию фокальной адгезии. . Это может быть связано с тем, что взрыв информации в области геномики и протеомики не сопровождался соответствующим развитием знаний в области липидов. Физиологическое значение липидов иллюстрируется многочисленными заболеваниями, которым способствуют липидные аномалии. Чтобы понять роль липидного состава мембраны в сохранении адгезии эпителиальных клеток к субстрату, ранее было изучено, как специфические изменения липидного состава мембран in vivo влияют на поддержание фокальных спаек в клетках собирательных протоков почечных сосочков.

Ключевые слова: липиды мембран, фокальные спайки, клетки собирательных трубочек, адгезия клеток к внеклеточному матриксу, почечный сосочек

Правильное функционирование органа зависит от его тканевой организации, которая, в свою очередь, зависит от структур, обеспечивающих клетки прикрепляться к внеклеточному матриксу (ECM). Лучше всего охарактеризованы спайки клеточно-внеклеточного матрикса (ECM) — фокальные спайки (FAs). Сборка ЖК происходит путем связывания интегрин-внеклеточного домена с белками ВКМ с последующим взаимодействием цитоплазматического домена β-интегрина с талином, который, в свою очередь, связывает винкулин. ¹ Винкулин может связываться более чем с десятью различными партнерами, поэтому теоретическое число различных комбинаций молекулярных взаимодействий, участвующих в связывании интегрина с актином, огромно.

С другой стороны, сообщалось, что многие молекулярные компоненты, которые регулируют адгезию клеток к ВКМ, связаны с холестерином и обогащенными сфинголипидами устойчивыми к детергентам мембранными микродоменами (DRM), которые также обогащены кислой фосфолипид PI(4,5)P ₂ . ^{13 , 14} Несмотря на значимость мембранных липидов для сборки ЖК, насколько нам известно, ранее не было сообщений о составе мембранных липидов, где ЖК локализуются in vivo, или о том, как меняются локальные мембранный состав способствует поддержанию ФА.

Чтобы лучше понять роль липидного состава мембраны в сохранении адгезии эпителиальных клеток к внеклеточному матриксу, ранее было изучено, как специфические изменения липидного состава мембран in vivo влияют на поддержание ЖК. С этой целью исследования проводились с первично культивируемыми почечными сосочками крыс, собирающими клетки протоков, которые не подвергались генетическим манипуляциям. FA ранее были связаны с DRM, а также с локальным мембранным накоплением PI(4,5)P ₂ , и недавно было показано, что они могут регулировать порядок мембран. ^{13 – 16} Однако о прямой демонстрации присутствия ЖК в таких резистентных доменах и их биохимической характеристике ранее не сообщалось. С помощью процедуры двухэтапного центрифугирования и изменения концентрации сахарозы были выделены устойчивые к тритону Х-100 мембранные микродомены из микросомальной фракции первично культивируемых клеток собирательных трубочек, в которых расположены комплексы ЖК. ¹⁷ В такой DRM было обнаружено, что винкулин и талин связаны с PI(4,5)P ₂ и что оба белка взаимодействуют, что подтверждается анализом иммунопреципитации. Присутствие винкулина, связанного с PI(4,5)P ₂ , вместе с ассоциацией талина и винкулина в DRM, является биохимическим выражением существования комплексов FA в DRM, выделенных из почечных сосочков крысы. ¹⁷ После того, как было установлено, что ЖК-комплексы локализованы в DRM, липидный состав DRM был охарактеризован в сравнении с растворимыми фракциями Triton X-100. ¹⁷ Концентрация холестерина в DRM была в десять раз выше, чем в растворимой фракции Triton X-100. Что касается профиля фосфолипидов, DRM показал увеличение сфингомиелина на 70%, сопровождающееся увеличением на 30% фосфатидилэтаноламина и снижением на 40% фосфатидилсерина, а также отсутствием различий в концентрациях фосфатидилхолина и фосфатидилинозитола. Изучение индивидуального жирнокислотного состава фосфолипидов показало, что ДРМ обогащены арахидоновой кислотой в основном за счет фосфатидилэтаноламина, который удвоил ее содержание по отношению к фосфатидилэтаноламину в растворимой фракции Тритона Х-100. Количество DRM-полифосфоинозитидов, PI(4)P и PI(4,5)P ₂ , было в несколько раз выше, чем в растворимой фракции, что указывает на массивное накопление этих кислых фосфолипидов в DRM клеток собирательных трубочек почек. Известно, что PI(4)P и PI(4,5) P ₂ образуются при фосфорилировании фосфатидилинозитолов специфическими киназами. Синтез полифосфоинозитидов в DRM был в два раза выше, чем в растворимой фракции Triton X-100, судя по включению [ ³² P]-Pi в фосфолипиды, указывая на то, что фосфолипиды, связанные с DRM, метаболически активны. Высокое содержание полиненасыщенных фосфатидилэтаноламинов вместе с обогащением полифосфоинозитидами позволяет предположить, что такие DRM соответствуют внутреннему листку плазматической мембраны, что согласуется с тем фактом, что ЖК являются цитоплазматической стороной сайта клеточного контакта. ¹⁸ Было высказано предположение, что липидный состав таких DRM соответствует физиологической среде, в которую вводятся ЖК. ¹⁷

Предыдущие исследования in vitro показали, что внедрение винкулина или талина в липидный бислой зависит от состава фосфолипидов бислоя. ¹⁹ Для изучения влияния липидного состава мембраны на сохранение ЖК in vivo использовали вещества, воздействующие на мембрану, такие как метил-β-циклодекстрин (CDex), неомицин и LiCl. ЖК не выявляются в гистологических препаратах из интактной ткани, но могут наблюдаться в культивируемых клетках. Таким образом, мы воспользовались тем фактом, что культивируемые папиллярные клетки собирательных трубочек сохраняют свою тенденцию взаимодействовать с самообразующимся ECM, имитируя их поведение в интактной ткани. Таким образом, мы установили параллелизм между биохимическими данными, полученными из папиллярных микросом, и морфологическими наблюдениями с помощью иммунофлуоресцентной конфокальной микроскопии, выполненной в первичных культурах клеток собирательных трубочек. При использовании такой экспериментальной стратегии было продемонстрировано, что липидный состав мембраны влияет на сохранение ЖК in vivo, что ясно показано на изображениях иммунофлуоресценции, где окрашенные винкулином ЖК исчезли (). Различные воздействующие на мембраны агенты по-разному воздействуют на ЖК в зависимости от их способности изменять липидный состав мембраны. В соответствии с предыдущими сообщениями о гладкомышечных клетках лечение CDex не приводило к элиминации DRM. ¹⁶ Вместо этого CDex вызывал снижение уровня холестерина, а также перераспределение мембранных липидов. Фактически наблюдалось чистое увеличение содержания сфингомиелина и фосфатидилинозитола в DRM, уравновешиваемое снижением содержания фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина. Напротив, PI(4)P и PI(4,5)P ₂ существенно не изменились. Сообщалось, что DRM служит платформой для PI(4,5)P ₂ и что такое накопление PI(4,5)P ₂ служит для стабилизации собранных ЖК после связывания с винкулином. ¹⁴ Однако, хотя полифосфоинозитиды все еще накапливались в DRM после обработки CDex, белки FA, такие как винкулин и талин, не сохранялись в сборе с образованием FA (). На основании этих наблюдений можно предположить, что накопления полифосфоинозитидов в DRM недостаточно для стабилизации ЖК; но полифосфоинозитиды должны быть включены в DRM с определенным липидным составом, чтобы гарантировать эффективную стабилизацию ЖК. Эффект неомицина на организацию цитоскелета был приписан неудаче в PI(4,5) P ₂ способность связываться с белками цитоскелета, но липидный состав мембраны не изучался. ¹⁴ Было замечено, что помимо хорошо известного действия секвестрирующего агента PI(4,5)P ₂ , неомицин одновременно вызывает резкое снижение содержания холестерина DRM. ¹⁷ Холестерин является важным фактором, определяющим текучесть мембраны, поскольку он ограничивает беспорядочное движение полярных головок жирной ацильной цепи, но разделяет и рассеивает их хвосты, в результате чего внутренние области бислоя становятся немного более текучими. DRM богаты холестерином и сфинголипидами. ^{20 , 21} Несколько исследований показали, что физические свойства DRM, по-видимому, возникают в результате взаимодействия сфинголипидных углеводородных цепей с холестерином, который может образовывать жидкую упорядоченную фазу в жидкокристаллической фосфолипидной среде плазматической мембраны. . ²¹ Таким образом, возможно, что вредное воздействие неомицина на ЖК может быть связано не только с потерей доступности PI(4,5)P ₂ , но и со снижением содержания холестерина, что, несомненно, , изменяет физико-химические свойства новообразованной ДРМ. Кроме того, эта возможность коррелирует с тем фактом, что истощение запасов холестерина снижает латеральную подвижность мембранных белков, поскольку нарушает строго регулируемые взаимодействия PI(4,5)P ₂ с молекулами, контролирующими состояние и организацию актинового цитоскелета. ²²

Открыть в отдельном окне

Иммунофлуоресцентные изображения, показывающие влияние изменений липидного состава DRM на окрашенные винкулином фокальные спайки. (A) Культивированные клетки собирательных трубочек, помеченные винкулином, демонстрирующие типичные фокальные спайки. (B-D) Культивируемые клетки собирательных трубочек, обработанные 5 мМ метил-β-циклодекстрином, 1 мМ неомицином или 10 мМ LiCl соответственно. Обратите внимание на диссипацию окрашенных винкулином жирных кислот [сравните с необработанными клетками в (A)]. Стрелка: очаговые спайки. Прутки: 20 мкм.

Известно, что LiCl блокирует синтез фосфоинозитидов. ²³ Помимо ожидаемого снижения содержания PI(4)P и PI(4,5)P ₂ DRM, LiCl вызывал увеличение содержания холестерина и сфингомиелина, что сопровождалось значительным обогащением фосфатидилинозитолом. Важно отметить, что обработка культивируемых клеток собирательных трубочек CDex и неомицином индуцировала значительное снижение количества окрашенных винкулином, а также талином ЖК, в то время как LiCl вызывал только уменьшение количества окрашенных винкулином ЖК. ¹⁷ Известно, что ЖК представляют собой иерархические структуры, в которых по мере созревания собираются дополнительные белки ЖК. Талин является первым белком, который образует ЖК, а затем добавляется винкулин. ²⁴ Таким образом, даже без винкулина могут присутствовать талинсодержащие ЖК, что соответствует минимальной сборке ЖК. Известно, что винкулин должен быть связан с PI(4,5)P ₂ , чтобы оставаться в ЖК-бляшках. ¹² Селективное выделение винкулина из собранных ЖК может быть связано с их различным сродством к мембранным липидам. Таким образом, связывание винкулина с PI(4,5)P ₂ имеет низкое сродство, тогда как связывание с фосфатидилинозитолом имеет высокое сродство, но не служит для сборки винкулина в ЖК. ²⁵ Таким образом, снижение содержания PI(4,5)P ₂ вместе с высоким увеличением фосфатидилинозита, продуцируемого LiCl, может объяснять диссипацию винкулина из ЖК. Напротив, талин имеет высокое сродство к связыванию PI(4)P, и, таким образом, сниженной концентрации DRM-PI(4)P может быть достаточно для связывания талина. ²⁵ С другой стороны, кажется, что новая конформация DRM, в которой концентрация холестерина и сфингомиелина увеличена, может оказаться благоприятной для стабилизации талинсодержащих ЖК.

В настоящее время считается, что PI(4,5)P ₂ является мембранным фосфолипидом, который играет основную роль в поддержании собранных ЖК. Однако было замечено, что такой пул полифосфоинозитидов должен быть частью домена специфического липидного состава, чтобы служить мембранным липидом, который стабилизирует ЖК-бляшки. ¹⁷ Среди мембранных липидов и принимая во внимание, что снижение уровня холестерина было общей чертой вредного воздействия CDex и неомицина, мы предполагаем, что холестерин на самом деле является решающим липидом для активизации липидной среды для поддержания собранных ЖК-бляшек. В соответствии с нашими выводами в недавнем отчете сделан вывод, что порядок мембран в ЖК зависит от холестерина. ¹⁵

Мы использовали различные агенты, воздействующие на мембрану, только в качестве инструмента для изучения влияния липидного состава мембран на поддержание ЖК. Однако интересно отметить, что и неомицин, и LiCl являются фармакологическими агентами с известными нефротоксическими эффектами. В этом контексте наши наблюдения также могут иметь фармакологическую значимость. Действительно, неомицин является аминогликозидным антибиотиком, вызывающим тубулярный некроз. ²⁶ Таким образом, нарушение адгезии клеток к ВКМ, описанное выше, может быть объяснением пагубного эффекта, вызванного лечением неомицином, поскольку известно, что эпителиальные клетки должны быть связаны с внеклеточным матриксом, чтобы выжить и не погибнуть под действием аноикис. ²⁷ Кроме того, предполагается, что изменения в PI(4,5)P ₂ нарушают асимметрию липидов мембран при синдроме Скотта. ²⁸ С другой стороны, LiCl используется для лечения некоторых психических заболеваний человека, и известно, что длительное лечение этим средством вызывает изменения способности почек концентрировать мочу. ^{29 , 30} Хотя фармакологическая доза LiCl ниже (0,8–1 мМ), чем концентрация, используемая в наших экспериментах, хронические низкие дозы также могут влиять на ЖК. Нарушение винкулинсодержащих ЖК, описанное выше, может быть основной причиной, которая постепенно влияет на адгезию клеток к ВКМ, тем самым влияя на функцию почек. Более того, изменение липидного состава мембран, в основном обогащение холестерином, может нарушить расположение или функцию систем мембранных транспортеров, вовлеченных в нормальную физиологию почечных канальцев, таким образом влияя на процесс концентрации мочи.

В заключение, наша работа вносит новые доказательства важности липидного состава специфического мембранного липидного домена, в который включены жирные кислоты, и предполагает, что это может иметь значение для поддержания структур, которые связывают эпителий собирательных трубочек с внеклеточный матрикс.

Ранее публиковалось в Интернете как Cell Adhesion & Migration Электронная публикация: http://www.landesbioscience.com/journals/celladhesion/article/6604

1. Zamir E, Geiger B. Молекулярная сложность и динамика клетки -матричные спайки. Дж. Клеточные науки. 2001; 114: 3583–359.0. [PubMed] [Google Scholar]

2. Heise H, Bayere T, Isenberg G, Sackmann E. Тромбоциты человека P-235, талинподобный актин-связывающий белок, избирательно связывается со смешанными липидными бислоями. Биохим Биофиз Акта. 1991; 1061: 112–131. [PubMed] [Google Scholar]

3. Seelig A, Blatter XL, Frentzel A, Isenberg G. Фосфолипидное связывание синтетического пептида талина свидетельствует о внутреннем мембранном якоре талина. Дж. Биол. Хим. 2000; 275:17954–17961. [PubMed] [Google Scholar]

4. Martel V, Racaud-Sultan C, Dupe S, Marie C, Paulhe F, Galmiche A, Block MR, Albiges-Rizo C. Конформация, локализация и связывание интегрина талина зависят от его Взаимодействие с фосфоинозитидами. Дж. Биол. Хим. 2001; 276:21217–21227. [PubMed] [Академия Google]

5. Ниггли В., Димитров Д.П., Бруннер Дж., Бургер М.М. Взаимодействие компонента цитоскелета винкулина с бислойными структурами анализировали с помощью фотоактивируемого фосфолипида. Дж. Биол. Хим. 1986; 261:6912–6918. [PubMed] [Google Scholar]

6. Ниггли В., Зоммер ЛДП, Бруннер Дж., Бургер М.М. Взаимодействие in situ белка цитоскелета винкулина в бислоях изучает введение фотоактивируемой жирной кислоты в фибробласты живых куриных эмбрионов. Евр Дж Биохим. 1990; 187:111–117. [PubMed] [Академия Google]

7. Джонсон Р.П., Крейг С.В. Сайт связывания F-актина замаскирован внутримолекулярной ассоциацией головного и хвостового доменов винкулина. Природа. 1995; 373: 261–264. [PubMed] [Google Scholar]

8. Джонсон Р.П., Крейг С.В. Карбоксиконцевой хвостовой домен винкулина содержит загадочный сайт связывания кислых фосфолипидов. Biochem Biophys Res Commun. 1995; 210:159–164. [PubMed] [Google Scholar]

9. Баколица С., Коэн Д.М., Бэнкстон И.А., Бобков А.А., Кэдвелл Г.В., Дженнингс Л., Кричи Д.Р., Крейг С.В., Лиддингтон Р.С. Структурные основы активации винкулина в местах клеточной адгезии. Природа. 2004; 430: 583–586. [PubMed] [Академия Google]

10. Уикс Дж., Барри С.Т., Кричи Д.Р. Кислые фосфолипиды ингибируют внутримолекулярную ассоциацию между N- и С-концевыми областями винкулина, обнажая сайты связывания актина и фосфорилирования протеинкиназы С. Биохим Дж. 1996; 314:827–832. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

11. Джонсон Р.П., Ниггли В., Дюррер П., Крейг С.В. Консервативный мотив в хвостовом домене винкулина обеспечивает ассоциацию и вставку в бислои кислых фосфолипидов. Биохимия. 1998; 37:10211–10222. [PubMed] [Академия Google]

12. Gilmore AP, Burridge K. Регуляция связывания винкулина с талином и актином с помощью фосфатидилинозитол-4-5-бисфосфата. Природа. 1996; 381: 531–535. [PubMed] [Google Scholar]

13. Панде Г. Роль мембранных липидов в регуляции функций интегринов. Curr Opin Cell Biol. 2000; 12: 569–574. [PubMed] [Google Scholar]

14. Laux T, Fukami K, Thelen M, Golub T, Frey D, Caroni P. GAP43, MARCKS и CAP23 модулируют PI(4,5)2 в плазмалеммальных рафтах и ​​регулируют клеточную кору. динамика актина через общий механизм. Джей Селл Биол. 2000;149: 1455–1471. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

15. Gaus K, Lay SL, Balasubramanian N, Schwatz MA. Адгезия, опосредованная интегрином, регулирует порядок мембран. Джей Селл Биол. 2006; 174: 728–734. [Статья PMC free] [PubMed] [Google Scholar]

16. Бабийчук Э.Б., Дрегер А. Биохимическая характеристика устойчивых к детергентам мембран: системный подход. Биохим Дж. 2006; 397:407–416. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

17. Маркес М.Г., Леоката Ньето Ф., Фавале Н., Фернандес-Томе М.С., Стерин-Специале Н. Мембранный липидный состав играет центральную роль в поддержании адгезии эпителиальных клеток к внеклеточным матрица. Липиды. 2008;43:343–352. [PubMed] [Академия Google]

18. Покутта С., Вайс В.И. Цитоплазматическая поверхность мест контакта клеток. Curr Opin Struct Biol. 2002; 12: 255–262. [PubMed] [Google Scholar]

19. Изенберг Г., Ниггли В. Взаимодействие белков цитоскелета с мембранными липидами. Int Rev Цитология. 1998; 178:73–122. [PubMed] [Google Scholar]

20. Симонс К., Иконен Э. Функциональные рафты в клеточных мембранах. Природа. 1997; 387: 569–572. [PubMed] [Google Scholar]

21. Браун Д.А., Лондон Э. Структура и функция мембранных рафтов, богатых сфинголипидами и холестерином. Дж. Биол. Хим. 2000; 275:17221–17224. [PubMed] [Академия Google]

22. Kwik J, Boyle S, Fooksman D, Margolis L, Sheetz MP, Edidin M. Мембранный холестерин, латеральная подвижность и фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфатзависимая организация клеточного актина. ПНАС. 2003; 100:13964–13969. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23. Batty IH, Downes CP. Ингибирование синтеза фосфоинозитида и опосредованной мускариновыми рецепторами активности фосфолипазы C с помощью Li ⁺ как вторичное, селективное следствие истощения инозитола в клетках 1321N1. Биохим Дж. 1994;297:529–537. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

24. Zaidel-Bar R, Cohen M, Addadi L, Geiger B. Иерархическая сборка комплексов адгезии клеток и матрикса. Биохим Соц Транзакции. 2004; 32: 416–420. [PubMed] [Google Scholar]

25. Di Paolo G, Pellegrini L, Letinic K, Cestra G, Zoncu R, Voronov S, Chang S, Guo J, Wenk MR, De Camilli P. Набор и регулирование фосфатидилинозитолфосфаткиназы тип 1γ по домену FERM талина. Природа. 2002; 420:85–93. [PubMed] [Академия Google]

26. Nagai J, Takano M. Молекулярные аспекты обработки почек аминогликозидами и стратегии предотвращения нефротоксичности. Препарат Метаб Фармакокинет. 2004; 19: 159–170. [PubMed] [Google Scholar]

27. Ван де Вальтер Б., Хоутепен Ф., Хьюгслоот М., Тайденс И.Б. Подавление химически индуцированного апоптоза, но не некроза клеток эпителия проксимальных канальцев почек (LLC-PKI) с помощью киназы фокальной адгезии (FAK) J Biol Chem. 2001; 276:36183–36193. [PubMed] [Google Scholar]

28.

Comments |0|